PepMute™ siRNA Transfection Reagent

PepMute™ siRNA Transfection Reagent  產(chan) 品型號：SL100566

pep mute siRNA轉染劑由模擬病毒細胞穿透肽(CPPs)配製而成，是一種全新的siRNA遞送工具，在各種哺乳動物細胞中，1 nM siRNA下的沉默效率超過95%. 利用我們(men) 專(zhuan) 有的肽模擬技術(PST ),數百種病毒CPP被模擬、合成，並在各種哺乳動物細胞中篩選基因遞送功效(圖1)。PepMute試劑隨後被鑒定和驗證為(wei) 濃縮和轉染短(100 bp以下)單鏈或雙鏈核酸的特別有效的載體(ti) 是這樣的作為(wei) siRNA，miRNA模擬物和DNA寡聚物廣泛應用於(yu) 哺乳動物細胞。


圖一。一部表現侏儒的卡通片siRNA轉染試劑由PST開發

尺寸:
- PepMute試劑，1.0 mL，足以用於(yu) 約1，333個(ge) 反應，基於(yu) 在24孔板中轉染0.5~5.0 pmol siRNA或miRNA模擬物
-活力Mute轉染緩衝(chong) 液(5x)， 針對最大轉染效率配製8.0毫升5x濃縮儲(chu) 備液，製成40毫升工作溶液

應用:
- siRNA miRNA模擬物或mRNA轉染
- DNA/siRNA共轉染
- DNA寡核苷酸轉染

存儲(chu) :
在4°C下儲(chu) 存，用於(yu) 胃蛋白酶抑製劑PepMute轉染緩衝(chong) 液的試劑和RT(5倍)。如果儲(chu) 存得當，該產(chan) 品可穩定儲(chu) 存12個(ge) 月或更長時間。

優(you) 勢:
-在最終的1.0納米siRNA下具有出色的靜音性能
-多種細胞中超過95%的基因沉默
-一管反應，簡單的標準方案
-與(yu) 血清和抗生素相容
-適用於(yu) HTS的協議
-極低的細胞毒性
-非常實惠

PepMute siRNA轉染劑和品牌產(chan) 品之間的功效比較

圖二。在HEK293細胞中，使用1.0升PepMu，可以很好地沉默內(nei) 源性表達的KIF11(也稱為(wei) EG5)24孔板的每個(ge) 孔中含有te試劑和0.5皮摩爾EG5 siRNA。 KIF11(也稱為(wei) EG5)編碼 一種運動蛋白，屬於(yu)  驅動蛋白樣蛋白家族參與(yu) 細胞有絲(si) 分裂期間染色體(ti) 定位和雙極紡錘體(ti) 形成。KIF11水平的降低導致有絲(si) 分裂停滯。PepMute試劑有效地將EG5 siRNA(最終1.0 nM)遞送至HEK293細胞，導致轉染後48小時HEK293細胞的“聚集"表型超過陰性對照(使用假EG5 siRNA的最終1.0 nM)的80%，同時優(you) 於(yu) siRNA轉染試劑Lipofectamine RNAi max(RNAi max，1.0nM EG5 siRNA)/INTERFERin(1.0nM EG5 siRNA)/Dharmafect(10.0nM EG5 siRNA)和jetPRIME (20 nM EG5 siRNA)轉染後48小時，用尼康顯微鏡觀察(上圖)並定量(下圖)293細胞的表型。


圖3。PepMute轉染劑(上圖)與(yu) Dharmafect 4(中圖)和Lipofectamin的沉默效率比較eA549細胞上的RNAiMAX (RNAiMAX，下圖)siRNA轉染試劑。按照製造商的方案，通過上述三種轉染試劑，將靶向0.5-20nm不同終濃度的海腎螢光素酶的siRNA與(yu) 海腎螢光素酶基因(每孔0.5g pRL-CMV DNA)共轉染到生長在24孔板中的A549細胞中。 用海腎螢光素酶測定係統(Promega)在共轉染後36小時測定海腎螢光素酶活性。發光瓦用光度計(Beckman Coulter LD 400)在10s積分期間從(cong) 5.0 l裂解物中測量。熒光素酶活性表示為(wei) 10秒內(nei) 積分的光單位(RLU ),並標準化為(wei) 每毫克通過BCA分析來檢測細胞蛋白。誤差條代表從(cong) 三次實驗中得出的標準偏差。熒光素酶相對於(yu) 未處理的細胞計算硒沉默效率。在…期間PepMute和Dharmafect 4試劑從(cong) 1.0 nM的海腎螢光素酶siRNA中產(chan) 生顯著的基因沉默，lipofectamine RNAiMAX僅(jin) 在20 nM後產(chan) 生良好的敲除，而在低濃度siRNA(分別為(wei) 0.5和1.0 nM)下觀察到增強的基因表達。



圖4。PepMute轉染試劑通過分別反向轉染5.0和1.0 nM GFP siRNA，敲低了MCF7細胞(上圖)和U2OS細胞(下圖)中穩定的GFP表達。 綠色熒光蛋白在MCF7和U2OS細胞中穩定表達。將靶向GFP基因的siRNA(右圖)和假siRNA(左圖)分別以最終的5.0和1.0 nM導入MCF7和U2OS細胞 使用PepMute轉染試劑進行反向轉染。綠色熒光蛋白通過尼康熒光顯微鏡在轉染後48小時監測基因沉默。定量分析表明由pep mute siRNA轉染劑遞送的5.0和1.0 nM的GFP siRNA分別敲除MCF7和U2OS細胞中90%和95%穩定表達的GFP。

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