MagVigen™ Streptavidin Conjugates Kit

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MagVigen鏈黴親(qin) 和素磁性納米顆粒可以普遍結合任何生物素化的生物分子(例如抗體(ti) 、蛋白質、肽、DNA)。MagVigen鏈黴親(qin) 和素-生物素-生物分子複合物可使用磁性架(目錄號A20006)與(yu) 未結合的生物素-生物分子輕鬆分離。這提供了一種用磁性納米粒子標記生物分子的快速而簡潔的方法。純化的納米粒子-生物分子複合物可用於(yu) 多種下遊生物分離過程(例如蛋白質純化、免疫沉澱、細胞分離或去除以及分子檢測。)

MagVigen鏈黴親(qin) 和素理想地與(yu) 小鼠抗體(ti) 一起用於(yu) 從(cong) 獲自組織或器官的細胞群體(ti) 混合物中分離細胞(例如CTCs、幹細胞)。分離的細胞是活的，可以進一步培養(yang) 或用於(yu) 下遊分子分析，如mRNA分離和RT-PCR。使用MagVigen納米顆粒進行細胞分離無需使用色譜柱，因此細胞不會(hui) 因通過色譜柱基質而受到機械應力的影響。磁性分離的細胞高度純化，並保持其活力，是下遊應用的理想選擇。

mag vigen–鏈黴親和素用於細胞富集的優勢

• 簡單快速地製備納米顆粒-初級小鼠抗體綴合物
• 簡單溫和的細胞分離
• 強而持久的熒光信號
• 一致的高質量結果
• 高結合能力
• 高生物相容性
• 低非特異性結合

產品內容

• cat # 21005 c:MagVigen-鏈黴親和素在含0.02% NaN3和0.02% BSA的磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中提供。pH 7.4。每個小瓶包含1毫升的溶液，其顆粒濃度為2毫克/毫升，這足以結合10個

  9

  細胞。

納米粒子尺寸:使用動態光散射測量的200-500納米。
多分散指數 < 0.2.

容量:50微克生物素抗體(ti) /毫升納米顆粒

Cat# K21005C還包括:

• 洗滌緩衝液
• 洗脫緩衝液

除磁鐵外的所有材料都應儲(chu) 存在4°c下。

保質期:6個(ge) 月

草案

細胞富集

該協議提供了濃縮10的一般指南5 -106使用MagVigen鏈黴親(qin) 和素磁性納米顆粒的細胞。請根據具體(ti) 應用調整試劑的量。

1. 使用前，輕輕渦旋或吸取小瓶中的MagVigen鏈黴親和素磁性納米顆粒。




2. 等份20-50 μl納米粒子溶液用於富集實驗。

注意: 20-50 μl通常足以富集105 -106細胞。細胞捕獲效率可受多種因素影響，例如細胞群體(ti) 中靶細胞的頻率、細胞表麵表達的抗原/表位的密度以及抗體(ti) 親(qin) 和力。相應地調整納米顆粒的量。

3. 用500 μl洗滌緩衝液洗滌納米顆粒兩次。將磁鐵放在試管側麵1-2分鍾，將納米顆粒從溶液中分離出來，並小心去除上清液(磁鐵仍在側麵)。




4. 向納米顆粒中加入1μg-2μg生物素偶聯的抗體(體積為100- 200 μl ),並在旋轉器上孵育30-60分鍾。

注意: 50 μl納米粒子可以結合約2μg抗體(ti) 。

5. 用500 μl洗滌緩衝液洗滌納米顆粒-抗體綴合物兩次，以去除未結合的抗體。




6. 將納米顆粒-抗體綴合物重新懸浮於洗滌緩衝液(50 μl)中，並將其添加至細胞樣品，總體積為0.1-0.5 ml。




7. 在室溫下，將納米顆粒與細胞樣品在軌道振蕩器上孵育30分鍾。




8. 孵育後，使用磁鐵將納米顆粒(與細胞結合)從溶液中分離出來，並小心去除上清液。




9. 用500μl細胞培養基洗滌納米顆粒-細胞複合物兩次。




10. 分離的細胞可以重新懸浮在細胞培養基中用於下遊應用。

注意: 洗脫緩衝(chong) 液可用於(yu) 從(cong) MagVigen鏈黴親(qin) 和素磁性納米顆粒中洗脫目標蛋白質或細胞。

免疫沉澱

MagVigen納米顆粒可通過免疫沉澱分析鑒定新的蛋白質-蛋白質相互作用，其中MagVigen鏈黴親(qin) 和素生物素-抗體(ti) 複合物可用於(yu) 從(cong) 分析樣品(如細胞裂解物)中分離特定的目標蛋白質或蛋白質複合物。免疫沉澱的蛋白質可以通過電泳、蛋白質染色和質譜進一步分析。MagVigen納米顆粒比傳(chuan) 統微珠小得多。這一特征使得納米顆粒更容易接近抗原表位，並且對蛋白質或蛋白質-蛋白質複合物的天然功能幹擾更少。此外，MagVigen納米顆粒的表麵經過的塗層處理，可減少與(yu) 細胞蛋白質和其他生物分子的非特異性相互作用。該特征允許更具體(ti) 地“下拉"真實蛋白質複合物靶。

納米粒子清洗

為(wei) 了獲得納米顆粒的最佳結果，建議在添加到樣品之前清洗納米顆粒。

1. 渦旋MagVigen納米顆粒10-20秒。




2. 取50μl納米粒子溶液，加入到100μl 1X洗滌緩衝液中，渦旋混合。




3. 將磁鐵放在試管側麵2-5分鍾，將納米顆粒從溶液中分離出來，並小心去除上清液(磁鐵仍在側麵)。

注意: 在微量離心管的側(ce) 麵應該可以看到含有深棕色納米顆粒的透明沉澱物。

4. 清洗納米顆粒2次。

免疫沉澱

5. 向含有細胞裂解物的試管中加入2 μg生物素抗體(或按照公司方案推薦的量)。




6. 在冰上孵育一小時。




7. 向試管中加入50μl預洗的MagVigen納米顆粒。在4°c下旋轉2小時




8. 用磁鐵將納米顆粒從樣品溶液(細胞裂解物)中分離出來。去除上清液。




9. 用所用的50μl裂解緩衝液洗滌納米顆粒3次。




10. 最後一次清洗後，去除上清液，並向珠子中加入100μl洗脫緩衝液。




11. 渦旋並孵育5分鍾。




12. 從溶液中磁性分離納米粒子。收集上清液，同時避免幹擾珠粒。目標蛋白質存在於上清液中，準備進行分析。

外來體隔離

1. 使用前，輕輕渦旋或吸取小瓶中的MagVigen鏈黴親和素磁性納米顆粒。




2. 等份50 μl納米粒子溶液用於富集實驗。

注意: 50 μl通常足以富集1-10×105外來體(ti) 。外來體(ti) 捕獲效率可受多種因素影響，例如樣品中外來體(ti) 的頻率、外來體(ti) 表麵表達的抗原/表位的密度以及抗體(ti) 親(qin) 和力。相應地調整納米顆粒的量。

3. 用500 μl洗滌緩衝液洗滌納米顆粒兩次。將磁鐵放在試管側麵1-2分鍾，將納米顆粒從溶液中分離出來，並小心去除上清液(磁鐵仍在側麵)。




4. 向納米顆粒中加入500 ng生物素偶聯的抗體(體積為100-200 μl ),並在旋轉器上孵育30-60分鍾。

注意: 50 μl納米顆粒可以結合約200 ng的抗體(ti) 。

5. 用500 μl洗滌緩衝液洗滌納米顆粒-抗體綴合物兩次，以去除未結合的抗體。




6. 將納米顆粒-抗體綴合物重新懸浮於洗滌緩衝液(50 μl)中，並將其添加至細胞樣品，總體積為0.1-0.5 ml。




7. 在2°C±8°C的溫度下，將納米顆粒與預富集的外來體樣品在軌道振蕩器上孵育2小時或過夜




8. 孵育後，用磁鐵將納米顆粒(結合有外來體)從溶液中分離出來，小心除去上清液。




9. 用500μl洗滌緩衝液洗滌納米顆粒-外來體複合物。




10. 外來體結合的納米顆粒現在準備用於外來體裂解、凝膠電泳和蛋白質分析。

MagVigen™ Streptavidin Conjugates Kit