高純總RNA提取試劑盒

高純總RNA提取試劑盒

本試劑盒是基於(yu) 特殊優(you) 化的裂解液 RNApure 和 RNA 吸附柱的柱式總 RNA 提取試 劑盒，裂解液充分裂解並勻質化樣本，采用*特的矽基質膜吸附技術，通過離心吸附柱 在高鹽狀態下高效專(zhuan) 一的結合溶液中的 RNA，同時***限度的有效除去蛋白質、無機鹽 離子及有機雜質等；可從(cong) 動物組織、植物材料、各種微生物及培養(yang) 細胞等樣品中快速提 取總 RNA，每次可處理 30-50mg 組織或 5×106細胞，可同時處理多個(ge) 不同樣品。本試劑 盒提取得到的 RNA可直接應用於(yu) RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、體(ti) 外翻譯等實驗。

自備試劑

氯仿(新開封或提取 RNA 專(zhuan) 用)、無水乙醇。

操作步驟

1．各種材料的處理

1）植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或將植物組織剪碎後直接在 RNApure中迅速研磨，每 30-50 mg 組織加入 1ml RNApure，渦旋混勻。注意：樣品體(ti) 積一般不要超過 RNApure 體(ti) 積的 10%。

2）動物組織：取新鮮或-70℃凍存的動物組織盡量剪碎，每 30-50mg 組織加入 1ml  RNApure，勻漿儀(yi) 進行勻漿處理。或在液氮中研磨後加入 1ml RNApure 混勻。注意：樣品體(ti) 積一般不要超過 RNApure 體(ti) 積的 10%。

3）單層培養(yang) 細胞：吸去培養(yang) 液，可直接在培養(yang) 板中加入適量 RNApure（每 10cm²麵積需要 1ml RNApure），用取樣器反複吹打使細胞裂解。也可用胰蛋白酶處理後，將細胞溶液轉移至 Rnase-free 的離心管中，13000×g 離心 5 分鍾，收集細胞沉澱，仔細吸除所有上清，加入 1ml RNApure 混勻。

注意：

a. 收集細胞數量不要超過 1×10⁷。

b. RNApure 加量根據培養(yang) 板麵積決(jue) 定，不是由細胞數決(jue) 定。如果 RNApure 加量不足，可能導致提取的 RNA 中有 DNA 汙染。

c. 收集細胞時一定要將細胞培養(yang) 液去除幹淨，否則會(hui) 導致裂解不全，造成 RNA 的產(chan) 量降低。

4）細胞懸液：離心收集細胞。每 5×10⁶-1×10⁷動物、植物和酵母細胞或每 10⁷細菌細胞加入 1 ml RNApure。

注意：

a. 加入 RNApure 前不要洗滌細胞，以免 RNA 降解。

b. 一些酵母和細菌細胞可能需要勻漿儀(yi) 或液氮研磨處理。

5）血液處理：直接取新鮮的血液，加入 3 倍體(ti) 積 RNApure（推薦 0.25ml 全血加入 0.75mlRNApure），充分振蕩混勻。

6）可選步驟：對於(yu) 蛋白、脂肪、多糖或胞外物質含量高的樣品，如肌肉組織、脂肪組

規格 100 次

適用範圍:

RNA 提取

試劑盒組分：

RNApure Reagent 100ml

Buffer RW1 40ml*2

Buffer RW2 11ml*2

Rnase-free Water 10ml

Rnase-free吸附柱RB 50個(ge) *2

保存條件：

RNApure Reagent 4°C

其它組分 室溫

RNA 純化組織或植物的塊莖，可以在勻漿處理後 13,000×g 離心 10 分鍾以除去不溶物質，此時沉澱中含胞外物質、多糖和高分子量的 DNA，而 RNA 存在於(yu) 上清中。

2．樣品中加入 RNApure 後反複吹打幾次，使樣本充分裂解。室溫放置 5 分鍾，使蛋白核酸複合物全分離。

3．以每 1ml RNApure 加入 200ul 氯仿的比例加入氯仿，蓋好管蓋，劇烈振蕩 15 秒，室溫放置 2 分鍾。

4．13,000×g 離心 10 分鍾，此時樣品分為(wei) 三層：有機相，中間層和上層無色水相，RNA主要在上層水相中，將上層水相移到一個(ge) 新的 Rnase-free 離心管（自備）中。

5．在得到的水相溶液中加入 0.5 倍無水乙醇，顛倒混勻。

6．將上步所得溶液全部加入到已裝入收集管的吸附柱 RB 中。若一次不能加完溶液，可分多次轉入。13,000×g 離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

7．向吸附柱中加入 700ul Buffer RW1，13,000×g 離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

8．向吸附柱中加入 500ul Buffer RW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇），13,000×g 離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

9．重複步驟 8。

10．13,000×g 離心 2 分鍾，倒掉收集管中廢液。將吸附柱置於(yu) 室溫數分鍾，晾幹。

注意：這一步目的是將吸附柱中殘餘(yu) 乙醇去除，乙醇殘留會(hui) 影響後續酶促反應（酶切、PCR 等）。

11．將吸附柱置於(yu) 一個(ge) 新的 Rnase-free 離心管（自備）中，向吸附柱的中間部位加入30-50ul Rnase-free Water，室溫放置 1 分鍾，13,000×g 離心 1 分鍾，收集 RNA 溶液，-70℃保存 RNA，防止降解。

注意：1）Rnase-free Wate 體(ti) 積不應小於(yu) 30ul，體(ti) 積過小影響回收率。

2）如果要提高 RNA 的產(chan) 量，可用 30-50ul 新的 Rnase-free Water 重複步驟 11。

3）如果要提高 RNA 濃度，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，重複步驟 11。

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