通用型 ECL 顯色試劑盒

通用型 ECL 顯色試劑盒

增強型 ECL 化學發光檢測試劑盒用於(yu) 檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體(ti) 及其關(guan) 聯的抗原。其原理是，蛋白質或核酸在電泳後轉移到印跡膜上，以一抗及 HRP 標記的二抗結合膜上的目的蛋白，或以HRP 標記的探針直接或間接結合膜上的核酸。洗膜後用本產(chan) 品配製的 ECL 工作液，室溫孵育膜數分鍾，將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定於(yu) X 光片曝光暗盒。然後轉入暗室將 X 光膠片壓在膜上曝光數秒到數小時，顯影定影後蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在 X 光膠片上。

產(chan) 品組分

A 液

B 液

運輸與(yu) 保存方法

常溫運輸。頻繁使用可置於(yu) 室溫保存，一年穩定；長期不用，建議置於(yu) 4 ºC 保存延長效期。【注】：A 液需避光保存！

操作方法（以 X 光膠片為(wei) 例）

 1. 執行常規電泳、轉膜、HRP 標記抗體(ti) 或者 HRP 標記核酸探針孵育、洗膜。【注】：ECL 發光液是 HRP 的顯色底物，因此檢測係統最終必須基於(yu) HRP 酶標記抗體(ti) 或者核酸探針。 

2. 最後 1 次洗膜的同時，新鮮配製發光工作液（推薦 100-200 μL 發光液/cm2 膜）：分別取等體(ti) 積的 A 液和B 液，混勻備用。【注】：取 A 液和 B 液一定要用不同的槍頭；另建議立即使用工作液，室溫放置數小時後仍可使用但靈敏度略有降低。 

3. 用平頭鑷取出膜，搭在濾紙上瀝幹洗液，勿使膜全幹燥。用移液器將工作液加到膜上，使之充分接觸。室溫孵育 1-2 min，準備立即壓片曝光。4. 用平頭鑷子夾起膜，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，去除膜上多餘(yu) 液體(ti) ，留下少量工作液，不可讓膜全幹燥。 

5. 在 X 光膠片暗盒內(nei) 表麵鋪一張麵積大於(yu) 膜的保鮮膜。將印跡膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來全包裹印跡膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多餘(yu) 的保鮮膜。用濾紙吸去多餘(yu) 的發光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內(nei) ，蛋白帶麵向上。

 6. 暗房內(nei) 取一張 X 光膠片至於(yu) 包裹的膜上，壓片，曝光 30 sec-2 min，顯影定影衝(chong) 洗。【注】：曝光時間需根據曝光強度做相應的調整。若是背景過高，可使用兩(liang) 張 X 光膠片同時壓片。 

曝光方法 

使用 CCD 拍照：可以將膜放置於(yu) 工作液中，開機後按照使用說明，將膜取出，進行拍照。另外，也可以根據情況，調整機器測量參數，提高信噪比。 

注意事項 

1）為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。 

2）轉膜、封閉、孵育都需要避免氣泡，另外戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的幹淨。 

3）長時間曝光或蛋白過量，將加深背景並使條帶強弱變化失去線性關(guan) 係。曝光不足則條帶模糊。 

4）某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會(hui) 淬滅熒光，應選擇高質量保鮮膜

5）避免將多張膜置於(yu) 同一個(ge) 洗膜盒內(nei) 洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。 

6）使用肉眼可見的預染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。 

7）使用生物素-親(qin) 和素係統，避免使用牛奶封閉，可能會(hui) 導致背景過高。 

8）金屬氧化物顆粒可能會(hui) 造成膜上出現顆粒狀斑點，避免使用帶有鏽跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。

 9）疊氮*鈉（NaN3）能抑製 HRP 活性，若回收 HRP 標記探針或者抗體(ti) 應避免使用 NaN3，如必需使用勿超過 0.01%。 

10）本品無特殊毒性，按普通化學品處理。11) 本產(chan) 品僅(jin) 作科研用途!

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