組織無機磷含量測試盒

組織無機磷含量測試盒

微量法 100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi) ：

無機磷主要指磷酸根，參與(yu) 生物體(ti) 內(nei) 多種代謝，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質磷酸化和脫磷酸化等等，此外促進碳水化合物的合成、轉化和轉運。

測定原理：

鉬藍與(yu) 磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質，通過測定660nm光吸收，即可計算無機磷含量。

自備儀(yi) 器和用品：

離心機、水浴鍋、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。

試劑組成和配置：

試劑一：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 5mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨(lin) 用前配製，加入10 mL蒸餾水，充分溶解後加入試劑二（全部），混勻。

標準品：液體(ti) ×1支。

無機磷提取：

按照組織質量（g）：試劑一體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定：

1. 分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30 min，調節波長到660 nm，蒸餾水調零。

2.打開水浴鍋，調節溫度到40℃。

3. 空白管：取0.5mL EP管，依次加入100μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻後置於(yu) 40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min後於(yu) 660 nm測定吸光度，記為(wei) A空白管。

4. 標準管：取0.5mL EP管，依次加入10μL標準液，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻後置於(yu) 40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min後於(yu) 660 nm測定吸光度，記為(wei) A標準管。

5. 測定管：取0.5mL EP管，依次加入10μL上清液，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻後置於(yu) 40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min後於(yu) 660 nm測定吸光度，記為(wei) A測定管。

注意：空白管和標準管隻需測定一次。

組織無機磷含量計算：

1. 按照蛋白含量計算

無機磷含量(μmol/mg prot)= [C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×V總÷Cpr

=1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)÷Cpr

2. 按照樣本質量計算

無機磷含量(μmol/g 鮮重 )= [C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×V總÷W

=1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)÷W

C標準液：1mmol/L；V總：上清液總體(ti) 積，1mL=0.001 L；W：樣品質量，g。

注意事項：

1. 試劑三需臨(lin) 用前配製，並且當天使用完畢。

2. 40min內(nei) 完成比色。

3. *低檢出限為(wei) 10μmol/L。

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