維生素B1測試盒

維生素B1測試盒

微量法100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

維生素B1（Vitamin B1）是構成脫羧輔酶的主要成分，參與(yu) 細胞代謝中的三羧酸循環，是維持機體(ti) 正常代謝必須的水溶性維生素，在生物體(ti) 能量代謝中有重要的作用。

測定原理

VB1在堿性條件下還原鐵氰*鉀生成亞(ya) 鐵氰*鉀，亞(ya) 鐵氰*鉀與(yu) Fe3+在弱酸條件下生成普魯士藍，在704nm有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。

試劑組成和配製

提取液：液體(ti) 70mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 1mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 2mL×1支，4℃保存。

試劑三：液體(ti) 2mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體(ti) 5mL×1瓶，4℃保存。

試劑五：液體(ti) 3mL×1瓶，4℃避光保存。

樣本處理

1. 組織：將樣品磨碎，按照質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸餾水0.4mL，混勻後於(yu) 25℃，16000rpm離心10min，取上清測定（動物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心20-30min）。

2. 細胞：按照細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入0.6mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；加蒸餾水0.4mL，混勻後於(yu) 25℃，16000rpm離心10min，取上清測定。

3. 血清：直接測定。

測定操作

計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.017x+0.0031，R2 = 0.9991；x為(wei) 標準品濃度：μg/mL；y為(wei) △A（A測定管-A空白管）

1. 按照蛋白含量計算

VB1含量（μg/mg prot）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷Cpr

= 58.8×（△A-0.0031）÷ Cpr

2. 按照樣本質量計算

VB1含量（μg/g鮮重）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（W÷V樣總）

= 58.8×（△A-0.0031）÷ W

3. 按照細胞數量計算

VB1含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（細胞數量÷V樣總）

= 58.8×（△A-0.0031）÷ 細胞數量

4. 按照液體(ti) 體(ti) 積計算

VB1含量（μg/mL）=（△A-0.0031）÷ 0.017

= 58.8×（△A-0.0031）

V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

b．用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.0085x +0.0031，R2 = 0.9991；x為(wei) 標準品濃度：μg/mL；y為(wei) △A（A測定管-A空白管）

1. 按照蛋白含量計算

VB1含量（μg/mg prot）=（△A -0.0031）÷ 0.0085÷Cpr

= 117.65×（△A-0.0031）÷ Cpr

2. 按照樣本質量計算

VB1含量（μg/g鮮重）=（△A-0.0031））÷ 0.0085÷（W÷V樣總）

= 117.65×（△A-0.0031）÷ W

3. 按照細胞數量計算

VB1含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.0085÷（細胞數量÷V樣總）

= 117.65×（△A-0.0031）÷ 細胞數量

4. 按照液體(ti) 體(ti) 積計算

VB1含量（μg/mL）=（△A-0.0031）÷ 0.0085

= 117.65×（△A-0.0031）

V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

注意事項

1. 若測定結果中吸光值超過2，請將樣本稀釋後進行測定，並在計算公式中乘以稀釋倍數。

2. 蛋白濃度較高的樣品，比如動物組織，若顯色完成後有沉澱產(chan) 生，將樣本稀釋後再重新測定，並在計算公式中乘以稀釋倍數。

3. 顯色完成後立即進行測定。

4. 標準曲線線性範圍為(wei) 0.1-10μg/mL。

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