維生素E測試盒

維生素E測試盒

微量法100T/48S

測定意義(yi)

維生素E（Vitamin E）是一種脂溶性維生素，其水解產(chan) 物為(wei) 生育酚，是生物體(ti) 中最主要的抗氧化劑之一，能阻止不飽和脂肪酸收到過氧化作用的損傷(shang) ，維持不飽和脂肪酸細胞膜的完整性和正常功能，具有延緩衰老、預防溶血性貧血作用，在醫藥、化妝品、保健品、食品行業(ye) 具有較高的應用價(jia) 值。

測定原理

VE還原Fe3+為(wei) Fe2+，Fe2+與(yu) 1,10-菲羅啉產(chan) 生有色絡合物，在530nm有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、漩渦震蕩儀(yi) 。

試劑組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 2mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體(ti) 2mL×1支，4℃保存。

試劑三：液體(ti) 2mL×1支，4℃保存。

試劑四：液體(ti) 6mL×1瓶，4℃保存。

樣本處理

1. 組織：按照質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，勻漿後用提取液定至1mL，定至在漩渦混勻儀(yi) 上震蕩5min，於(yu) 25℃，5000g離心10min，取上層測定。

2. 細胞：按照細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）後在漩渦混勻儀(yi) 上震蕩5min，於(yu) 25℃，5000g離心10min，取上層測定。

3. 血清：取0.1mL，加0.9mL提取液，漩渦儀(yi) 混勻上震蕩5min，於(yu) 25℃，5000g離心10min，取上層測定。

測定操作

計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.22x + 0.0065 R2 = 0.9978

1. 按照蛋白含量計算

VE含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷（V樣×Cpr）

= 9.09×（△A -0.0065）÷ Cpr

2. 按照樣本質量計算

VE含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷（V樣×W÷V樣總）

= 9.09×（△A -0.0065）÷ W

3. 按照細胞數量計算

VE含量（μg/104 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）

= 9.09×（△A -0.0065）÷ 細胞數量

4. 按照液體(ti) 體(ti) 積計算

VE含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷V樣×10

= 90.9×（△A -0.0065）

V反總：反應總體(ti) 積，0.2mL；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.1mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

2. 用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.11x + 0.0065 R2 = 0.9978

1. 按照蛋白含量計算

VE含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V反總÷（V樣×Cpr）

= 18.18×（△A -0.0065）÷ Cpr

2. 按照樣本質量計算

VE含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷0.11×V反總÷（V樣×W÷V樣總）

= 18.18×（△A -0.0065）÷ W

3. 按照細胞數量計算

VE含量（μg/104 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）

= 18.18×（△A -0.0065）÷ 細胞數量

4. 按照液體(ti) 體(ti) 積計算

VE含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷0.11×V反總÷V樣×10

= 181.8×（△A -0.0065）

V反總：反應總體(ti) 積，0.2mL；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.1mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

注意事項

若反應體(ti) 係產(chan) 生沉澱，需要將樣品進行適當的稀釋，並在計算公式中乘以稀釋倍數。

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