酸性磷酸酶（ACP）測試盒

酸性磷酸酶（ACP）測試盒

微量法 100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi) ：                           

ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機磷酸，常見於(yu) 巨噬細胞的溶酶體(ti) 內(nei) 。ACP常用於(yu) 前列腺癌的輔助診斷。

測定原理：

在酸性環境中，ACP催化對硝基苯磷酸二鈉水解生成4-硝基苯酚，在405nm有特征光吸收；通過測定405nm吸光度增加速率，來計算ACP活性。

自備儀(yi) 器和用品：

酶標儀(yi) 、96孔板、台式離心機、水浴鍋、可調式移液器和蒸餾水。

試劑組成和配製：

試劑一：液體(ti) 60 mL×2瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 50 mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體(ti) 50 mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1 mL試劑一）進行冰浴勻漿，4℃、10000g離心10 min，取上清液待測。

2. 細菌或細胞：按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：試劑一體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1 mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3 min）；然後10000g，4℃，離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

3. 血液可直接測定，或者適當稀釋後測定。

測定：

1. 酶標儀(yi) 預熱30 min，調節波長到405 nm。

2. 在 EP 管中加入下列試劑

混勻，吸取 200µL 加入96 孔板中，405 nm 下測定各管吸光值。ΔA=A測定管-A對照管。

注意：每個(ge) 測定管需做一個(ge) 對照管。

ACP活性計算：

標準曲線 y = 7.3336x + 0.0179；R2 = 0.9996；x為(wei) 標準品濃度（μmol/mL），y為(wei) 吸光值ΔA。

1. 血液中ACP活性計算

活性單位定義(yi) ：30℃中每毫升血液每分鍾催化產(chan) 生1μmol 4-硝基苯酚定義(yi) 為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

ACP活力(μmol/min/mL)=（ΔA-0.0179）÷7.3336 ×V反總÷T÷V樣

= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）

2. 組織、細菌或細胞中ACP活性計算

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義(yi) ：30℃中每毫克蛋白每分鍾催化產(chan) 生1 μmol 4-硝基苯酚定義(yi) 為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

ACP活力(μmol/min/mg prot)= (ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反總÷T÷(V樣×Cpr)

=0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

活性單位定義(yi) ：30℃中每克組織每分鍾催化產(chan) 生1 μ mol 4-硝基苯酚定義(yi) 為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

ACP活力 (μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反總÷T÷(W×V 樣÷V 樣總)

= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷W

（3）按照細菌或細胞數量計算

活性單位定義(yi) ：30℃中每104個(ge) 細菌或細胞每分鍾催化產(chan) 生1 μ mol 4-硝基苯酚定義(yi) 為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

ACP 活力(μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反總÷T÷（細胞數量×V 樣÷V 樣總）

= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷細胞數量

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積（mL），1 mL； W ：樣品質量，g； V樣：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積（mL），0.01 mL；V樣總：提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間（min），30 min；500：細胞或細菌總數，500萬(wan) 。

注意事項：

ACP不穩定，尤其在37℃和pH大於(yu) 7的條件下活力喪(sang) 失快，因此酸性磷酸酶樣品一般需當天準備；血清樣品中，每毫升血清中加入10mg檸檬酸氫二鈉或者5mg硫酸氫鈉，使pH降至6.5以下，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置於(yu) 4℃可保存1周。

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