蔗糖合成酶（分解方向 SSⅠ)測試盒

蔗糖合成酶（分解方向 SSⅠ)測試盒

 微量法 100管/48樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi)

蔗糖是源（葉片等）光合產(chan) 物向“庫"器官運輸的主要形態。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是雙向反應酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代謝的關(guan) 鍵酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性對於(yu) 植物蔗糖降解以及澱粉合成具有重要意義(yi) 。

測定原理

SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成遊離果糖和UDPG，采用3,5－二硝基水楊酸法測定還原糖的含量來反映酶活性的高低。

需自備的儀(yi) 器和用品

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰

試劑的組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體(ti) 10mL×1瓶，4℃保存；

試劑二： 液體(ti) 5mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×2支，-20℃保存；臨(lin) 用前每支加入1.2mL試劑二充分溶解待用，現配現用；

試劑四：液體(ti) 6mL×1瓶，4℃保存。

樣品測定的準備： 

按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至540nm，蒸餾水調零。

2. 樣本測定，（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，30℃準確水浴30min後，95℃水浴10min

95℃水浴5min左右，冷卻至室溫

混勻，取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中，540nm下測定各管

吸光值。ΔA=A測定-A對照。每個(ge) 測定管需要設一個(ge) 對照管。

SS-Ⅰ活性計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為(wei) y = 0.0012x - 0.0492；x為(wei) 標準品濃度（μg/mL），y為(wei) ΔA。

2、按照蛋白濃度計算

單位定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾催化產(chan) 生1μg 還原糖定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照樣本鮮重計算

單位定義(yi) ：每g組織每分鍾催化產(chan) 生1μg 還原糖定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g鮮重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.05mL； V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為(wei) y = 0.0006x - 0.0492；x為(wei) 標準品濃度（μg/mL），y為(wei) ΔA。

2、按照蛋白濃度計算

單位定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾催化產(chan) 生1μg 還原糖定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T

=277.8×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照樣本鮮重計算

單位定義(yi) ：每g組織每分鍾催化產(chan) 生1μg 還原糖定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g鮮重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T

=277.8×(ΔA+0.0492) ÷W

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.05mL； V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。

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