葡萄糖6磷酸(6PG)測試盒

葡萄糖6磷酸(6PG)測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：

 6PG (Glucose-6-phosphate，葡萄糖-6-磷酸，又稱6-磷酸葡萄糖)，是糖酵解和磷酸戊糖途徑的中間產(chan) 物，廣泛存在於(yu) 動植物體(ti) 和微生物中。在糖酵解的第一步反應中，葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸，然後通過磷酸葡萄糖異構酶的催化形成果糖-6-磷酸，以繼續糖酵解的其它步驟；而在戊糖磷酸途徑中，葡萄糖-6-磷酸是其第一個(ge) 底物，該過程也是生成NADPH的主要途徑。此外，葡萄糖-6-磷酸也能轉化形成糖原或澱粉而被儲(chu) 存起來。

測定原理：

6-磷酸葡萄糖脫氫酶可催化6PG和NADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH，NADPH在1-mPMS的作用下使WST-8顯橙黃色，在450 nm下測定吸光值。

需自備的儀(yi) 器和用品：

酶標儀(yi) 、台式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水。

試劑的組成和配製：

提取液：液體(ti) 60 mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體(ti) 12mL×1瓶， 4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；

試劑三：液體(ti) 1.5mL×1管， 4℃避光保存。

6PG提取：

1、細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）， 8000g，25℃離心10min，取上清待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿，8000g，25℃離心10min，取上清待測。

3、血清（漿）等液體(ti) 樣品：直接測定。

測定步驟：

1、酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至450nm。

2、試劑二的配製：臨(lin) 用前加入3mL水充分溶解待用，用不完的試劑分裝後-20℃保存；

3、工作液的配製：臨(lin) 用前按照樣本數量，按以下比例配製工作液

4. 樣本測定

按下表在96孔板中加入如下試劑

37℃避光孵育30min，450nm下測定吸光值A測定與(yu) A對照，△A=A測定-A對照。每個(ge) 測定管需設一個(ge) 對照管。

6PG含量計算：

1、標準條件下測定回歸方程為(wei) y = 3.8589x - 0.0016，R2 = 0.997； x為(wei) 6PG含量（μmol/mL），y為(wei) 吸光值。

2、按照血清（漿）體(ti) 積計算

6PG含量（nmol/mL）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷V1×1000

=259.1×(△A+0.0016)

3、按照蛋白濃度計算

6PG含量（nmol/mg prot）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷(V1×Cpr)×1000

=259.1×(△A+0.0016) ÷Cpr

4、按照樣品質量計算

6PG含量（nmol/g鮮重）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷(W ×V1÷V2）×1000

=259.1×(△A+0.0016) ÷W

3、按照細菌或細胞密度計算

6PG含量（nmol/104 cell）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷（500×V1÷V2）×1000

=0.518×(△A+0.0016)

V1：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.05mL；V2：加入提取液體(ti) 積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬(wan) ；1000，μmol到nmol的換算係數。

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