苯丙氨酸解氨酶(PAL)測試盒

苯丙氨酸解氨酶(PAL)測試盒

微量法 100管/96樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi)

PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在於(yu) 各種植物和少數微生物中，是植物體(ti) 內(nei) 苯丙烷類代謝的關(guan) 鍵酶，與(yu) 一些重要的次生物質如木質素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關(guan) ，在植物正常生長發育和抵禦病菌侵害過程中起重要作用。

測定原理

PAL催化L-苯丙氨酸裂解為(wei) 反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm處有最大吸收值，通過測定吸光值升高速率計算PAL活性。

所需的儀(yi) 器和用品

紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、台式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 15mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨(lin) 用前加入4mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；

試劑三：液體(ti) 1mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取

按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至290nm，蒸餾水調零。

2. 準備96孔UV板一塊（非普通酶標板，普通酶標板隻能透過可見光，不能透過紫外光，檢測波長小於(yu) 340nm務必使用UV板）。

3、在EP管或96孔UV板中按順序加入下列試劑

混勻，30℃ 準確反應30min

混勻，靜置10min後， 290nm處記錄測定管吸光值A1和對照管吸光值A2，△A=A1-A2。

注意：對照管隻要做一管

PAL活性計算

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1. 按蛋白濃度計算

單位定義(yi) ：每mg組織蛋白在每mL反應體(ti) 係中每min使290nm下吸光值變化0.1為(wei) 一個(ge) 酶活性單位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（Cpr× V樣）÷0.1÷T =13.3×ΔA÷Cpr

2. 按樣本鮮重計算

單位定義(yi) ：每g組織在每mL反應體(ti) 係中每min使290nm下吸光值變化0.1為(wei) 一個(ge) 酶活性單位。

PAL（U/g鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.1÷T =13.3×ΔA÷W

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.2mL； V樣：加入樣本體(ti) 積，0.005mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。

用96孔板測定的計算公式如下

（1） 按蛋白濃度計算

單位定義(yi) ：每mg組織蛋白在每mL反應體(ti) 係中每min使290nm下吸光值變化0.05為(wei) 一個(ge) 酶活性單位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.05÷T =26.6×ΔA÷Cpr

2. 按樣本鮮重計算

單位定義(yi) ：每g組織在每mL反應體(ti) 係中每min使290nm下吸光值變化0.05為(wei) 一個(ge) 酶活性單位。

PAL（U/g鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.05÷T =26.6×ΔA÷W

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.2mL； V樣：加入樣本體(ti) 積，0.005mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。

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