脲酶（UE）測試盒

脲酶（UE）測試盒

微量法100管/48樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：

UE能夠水解尿素，產(chan) 生氨和碳酸。UE活性與(yu) 有機物質含量、全氮和速效氮含量呈正相關(guan) ，反應了氮素狀況。

測定原理：

利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產(chan) 生的NH3-N。

需自備的儀(yi) 器和用品：

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

試劑的組成和配製：

提取液：液體(ti) 60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1瓶，臨(lin) 用前加入9mL蒸餾水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的試劑4℃保存；

試劑二：液體(ti) 22mL×1瓶，4℃保存；

試劑三A液：液體(ti) ×1支，4℃保存；試劑三B液：液體(ti) ×1瓶，4℃保存；臨(lin) 用前將A液倒入B液中混合，待用；用不完的試劑4℃保存一周；

試劑四：液體(ti) 2mL×1瓶，4℃保存；

樣本的前處理： 

1、細菌、細胞或組織樣品的製備：

細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至578nm，蒸餾水調零。

2、酶促反應

混勻，放入37℃水浴1h後，10000g 25℃離心10min，取上清液。

2、將上清液稀釋10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸餾水）。

3、測氨量（在微量石英比色皿或96孔板中加入下列試劑）

充分混勻，室溫放置20min

混勻，於(yu) 578nm處，蒸餾水調零，讀吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個(ge) 測定管設一個(ge) 對照管。

UE活力計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為(wei) y = 0.0915x +0.0373；x為(wei) 標準品濃度（μg/mL），y為(wei) 吸光值A。

1、血清（漿）UE活力的計算:

單位的定義(yi) ：每mL血清（漿）每分鍾產(chan) 生1μg NH3-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

UE活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反總÷V樣÷T=27.32×(ΔA -0.0373)

單位的定義(yi) ：每天每g土樣中產(chan) 生1μg NH3-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

2、組織、細菌或細胞中1μg NH3-N活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾產(chan) 生1μg NH3-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

UE活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反總÷(V樣×Cpr)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每g組織每分鍾產(chan) 生1μg NH3-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

UE活力（μg/min/ g 鮮重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞每分鍾產(chan) 生1μg NH3-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

UE活力（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.0546×ΔA

10：稀釋倍數；T：反應時間，60min； V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積：0.3mL；V樣：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.02mL；V樣總：提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL； W：樣本質量， g；500：細菌或細胞總數，500萬(wan) 。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為(wei) y = 0.04575x +0.0373；x為(wei) 標準品濃度（μg/mL），y為(wei) 吸光值A。

1、血清（漿）UE活力的計算:

單位的定義(yi) ：每mL血清（漿）每分鍾產(chan) 生1μg NH3-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

UE活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反總÷V樣÷T=54.64×(ΔA -0.0373)

單位的定義(yi) ：每天每g土樣中產(chan) 生1μg NH3-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

2、組織、細菌或細胞中1μg NH3-N活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾產(chan) 生1μg NH3-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

UE活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反總÷(V樣×Cpr)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每g組織每分鍾產(chan) 生1μg NH3-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

UE活力（μg/min/g 鮮重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞每分鍾產(chan) 生1μg NH3-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

UE活力（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.1092×ΔA

10：稀釋倍數；T：反應時間，60min； V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積：0.3mL；V樣：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.02mL；V樣總：提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL； W：樣本質量， g；500：細菌或細胞總數，500萬(wan) 。

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