植酸酶測試盒

植酸酶測試盒 

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

植酸酶（phytase）是催化植酸及其鹽類水解為(wei) 肌醇與(yu) 磷酸（鹽）的一類酶的總稱，屬磷酸單酯水解酶，它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉化為(wei) 可供有機體(ti) 利用的有效磷，降低糞便中的磷含量，減輕對環境的汙染，改善營養(yang) 成分的吸收和利用，因此具有極其廣泛的研究和應用價(jia) 值。

測定原理

植酸酶在一定溫度和pH值條件下，水解底物植酸鈉生成無機磷與(yu) 肌醇衍生物，無機磷在酸性環境中與(yu) 鉬酸銨顯色劑反應生成藍色複合物，在700nm處有特征吸收峰，根據700nm處吸光值變化可計算得植酸酶活性。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋，超聲溶解器，回旋式振蕩器。

試劑組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

緩衝(chong) 液：液體(ti) 15mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1支，4℃保存，臨(lin) 用前加緩衝(chong) 液6mL配製，現用現配；用不完的試劑4℃保存一個(ge) 月。

試劑二：液體(ti) 15mL×1瓶，4℃保存。

顯色劑：粉劑×8瓶，4℃保存，臨(lin) 用前根據用量每瓶加0.4mL雙蒸水溶解，再加1.6mL試劑二混勻。

樣本處理

1. 酶製劑：按照質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：500~1000的比例（建議稱取約0.001g，加入1mL提取液）加入提取液，在超聲波溶解器上溶解15min，再用回旋式振蕩器振蕩15min，待測。

2. 組織：按照質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，在超聲波溶解器上溶解15min，再用回旋式振蕩器振蕩15min，4℃，4000g離心10min，取上清待測。

3. 飼料樣品：飼料烘幹粉碎，過40目篩，按照質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，在超聲波溶解器上溶解15min，再用回旋式振蕩器振蕩15min，4℃，4000g離心10min，取上清待測。

4. 培養(yang) 液等液體(ti) 樣品，混勻直接測定。

測定操作表

酶活性計算公式

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.2764x + 0.0082，R2 = 0.9998；x為(wei) 標準品濃度（μmol/mL），y為(wei) 吸光值。

1. 按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：在37℃，pH5.5的條件下，每毫克蛋白每分鍾從(cong) 5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機磷為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/min/mg prot）=（△A-0.0082）÷0.2764÷Cpr÷T =0.1206×（△A-0.0082）÷Cpr2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：在37℃，pH5.5的條件下，每克樣本每分鍾從(cong) 5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機磷為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/min /g 鮮重）=（△A-0.0082）÷0.2764÷W÷T =0.1206×（△A-0.0082）÷W

3. 培養(yang) 液等液體(ti) 樣品

酶活性定義(yi) ：在37℃，pH5.5的條件下，每毫升液體(ti) 每分鍾從(cong) 5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機磷為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/min /mL）=（△A-0.0082）÷0.2764÷T =0.1206×（△A-0.0082）

Cpr：樣本蛋白含量，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，30min。

b. 用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.1382x + 0.0082，R2 = 0.9998；x為(wei) 標準品濃度（μmol/mL），y為(wei) 吸光值。

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：在37℃，pH5.5的條件下，每毫克蛋白每分鍾從(cong) 5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機磷為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/min/mg prot）=（△A-0.0082）÷0.1382÷Cpr÷T = 0.2412×（△A-0.0082）÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：在37℃，pH5.5的條件下，每克樣本每分鍾從(cong) 5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機磷為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/min /g 鮮重）=（△A-0.0082）÷0.1382÷W÷T =0.2412×（△A-0.0082）÷W

3. 培養(yang) 液等液體(ti) 樣品

酶活性定義(yi) ：在37℃，pH5.5的條件下，每毫升液體(ti) 每分鍾從(cong) 5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機磷為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/min /mL）=（△A-0.0082）÷0.1382÷T =0.2412×（△A-0.0082）

Cpr：樣本蛋白含量，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，30min。

注意事項

1、顯色劑需要臨(lin) 用前根據用量配製，每一瓶是13個(ge) 樣本的用量，新配製的顯色劑若有顏色則已經汙染或者試劑過期，應放棄使用。

2、ΔA線性範圍為(wei) 0.01-1。

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