果膠裂解酶測試盒

果膠裂解酶測試盒

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

果膠裂解酶（EC4.2.2.10）是果膠酶的重要組成部分，是一種能降解植物細胞壁，導致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶，來源比較廣泛，主要來源於(yu) 微生物，可用於(yu) 果汁、果酒的澄清，提高水果出汁率，植物病毒的純化，紙漿的漂白和紡織品的生物精煉，在減少環境汙染和降低能源消耗方麵具有潛在的應用價(jia) 值。

測定原理

果膠裂解酶作用於(yu) 果膠中的α-1,4糖苷鍵，生成在還原端C4和C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸，在235nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 6mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 6mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體(ti) 6mL×1瓶，4℃保存。

酶液提取

1．組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2．細菌、真菌：按照細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後10000g，4℃，離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

3. 培養(yang) 液：直接測定。

測定操作表

1. 分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30min，調節波長至235nm，蒸餾水調零。

2. 操作表

酶活性計算公式

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1. 組織中PL活性

（1）按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH5.5條件下，每毫克蛋白每分鍾分解果膠產(chan) 生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PL活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 64.1×△A÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH5.5條件下，每克組織每分鍾分解果膠產(chan) 生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PL活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T

= 64.1×△A÷W

2. 細菌、真菌PL活性

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH5.5條件下，每104個(ge) 細胞每分鍾分解果膠產(chan) 生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PL活性（nmol/min/104cell）= △A ÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T 

 = 64.1×△A÷細胞數量

3. 培養(yang) 液PL活性

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH5.5條件下，每毫升培養(yang) 液每分鍾分解果膠產(chan) 生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PL活性（nmol/min/mL）= △A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T

= 64.1×△A

ε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光係數：5200L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體(ti) 積，0.2mL；V樣：反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.02mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質量，g；T：反應時間，30min

2. 用96孔板測定的計算公式如下

1. 組織中PL活性

（1）按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH5.5條件下，每毫克蛋白每分鍾分解果膠產(chan) 生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PL活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 128.2×△A÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH5.5條件下，每克組織每分鍾分解果膠產(chan) 生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PL活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T

= 128.2×△A÷W

2. 細菌、真菌PL活性

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH5.5條件下，每104個(ge) 細胞每分鍾分解果膠產(chan) 生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PL活性（nmol/min/104cell）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T 

    = 128.2×△A÷細胞數量

3. 培養(yang) 液PL活性

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH5.5條件下，每毫升培養(yang) 液每分鍾分解果膠產(chan) 生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PL活性（nmol/min//mL）= △A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T

= 128.2×△A

ε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光係數：5200L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應總體(ti) 積，0.2mL；V樣：反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.02mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質量，g；T：反應時間，30min

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