乙醛脫氫酶（ALDH）測試盒

乙醛脫氫酶（ALDH）測試盒

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種，廣泛存在於(yu) 各種動物、植物和微生物體(ti) 內(nei) 。主要作用是將乙醛氧化成乙酸，在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動物體(ti) 內(nei) ，線粒體(ti) 乙醛脫氫酶能把對生物體(ti) 有害的醇類轉化，所以在細胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關(guan) 注；同時，乙醛脫氫酶在分子生物學以及相關(guan) 疾病的檢測方麵有較廣泛的研究應用。

測定原理

在輔酶Ⅰ存在的條件下，乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉化為(wei) 乙酸和NADH，在340nm處的吸光值會(hui) 增加，測定340nm處的吸光值變化，可計算得到乙醛脫氫酶的活性。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、離心機、紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 6mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 2mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體(ti) 1mL×1支，4℃避光保存。

試劑四：液體(ti) 1mL×1支，4℃保存。

試劑五：液體(ti) 1mL×1支，4℃保存。

ALDH提取

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然後10000g，4℃，離心20min。

2. 細胞：按照細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後10000g，4℃，離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

3. 液體(ti) ：直接檢測。

測定操作表

1. 分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30min，調節波長至340nm。

2. 操作表

ALDH酶活計算

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按蛋白濃度計算

酶活定義(yi) ：每毫克蛋白每分鍾催化還原1nmol NAD+的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 804×△A÷Cpr

（2）按樣本質量計算

酶活定義(yi) ：每克樣品每分鍾催化還原1nmol NAD+的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 804×△A÷W

（3）按照細胞數量計算

酶活定義(yi) ：每104個(ge) 細胞每分鍾催化還原1nmol NAD+的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/104cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數量（萬(wan) 個(ge) ））÷T= 804×△A÷細胞數量（萬(wan) 個(ge) ）

（4）按液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活定義(yi) ：每mL樣本每分鍾催化還原1nmol NAD+的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/mL）= ×V反總÷V樣÷T= 804×△A

：NADH微摩爾消光係數，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.2mL；V樣：反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.04mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

b．用96孔板測定的計算公式如下

（1）按蛋白濃度計算

酶活定義(yi) ：每毫克蛋白每分鍾催化還原1nmol NAD+的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Crp）÷T = 1608×△A÷Cpr

（2）按樣本質量計算

酶活定義(yi) ：每克樣品每分鍾催化還原1nmol NAD+的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T = 1608×△A÷W

（3）按照細胞數量計算

酶活定義(yi) ：每104個(ge) 細胞每分鍾催化還原1nmol NAD+的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/104cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數量（萬(wan) 個(ge) ））÷T= 1608×△A÷細胞數量

（4）按液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活定義(yi) ：每mL樣本每分鍾催化還原1nmol NAD+的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/mL）= ×V反總÷V樣÷T= 1608×△A

：NADH微摩爾消光係數，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.2mL；V樣：反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.04mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

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