NADH氧化酶（NADH oxidase，NOX）試劑盒

NADH氧化酶（NADH oxidase，NOX）試劑盒

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：

NOX（EC 1.6.99.3）廣泛存在於(yu) 動物、植物、微生物和培養(yang) 細胞中，可在氧氣存在下，直接將NADH氧化為(wei) NAD。該酶不僅(jin) 參與(yu) NAD的再生，而且與(yu) 免疫反應密切相關(guan) 。

測定原理：

NOX能夠將NADH氧化為(wei) NAD，NADH的氧化與(yu) 2,6二氯酚靛藍（DCPIP）的還原相偶聯，藍色的DCPIP被還原為(wei) 無色的DCPIP，在600nm下測定藍色DCPIP的還原速率計算出NADH氧化酶活性的大小。

需自備的儀(yi) 器和用品：

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、台式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配製：

試劑一：液體(ti) 100mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：液體(ti) 20mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：液體(ti) 1.5mL×1瓶，-20℃保存；

試劑四：液體(ti) 25mL×1瓶，4℃保存。

試劑五：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨(lin) 用前加入5mL蒸餾水，用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融。

樣本的前處理：

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與(yu) 線粒體(ti) 蛋白的分離：

• 準確稱取0.1g組織或收集500萬(wan) 細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

• 將勻漿600g，4℃離心5min。

• 棄沉澱，將上清液移至另一離心管中，11100g，4℃離心10min。

• 上清液即為(wei) 除去線粒體(ti) 的胞漿蛋白，可用於(yu) 測定從(cong) 線粒體(ti) 泄漏的NOX（此步可選做）。

• 步驟④中的沉澱即為(wei) 線粒體(ti) ，加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重複30次），用於(yu) NOX活性測定。

血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至600nm，蒸餾水調零。

2. 樣本測定

（1）試劑四於(yu) 37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。

（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、200μL試劑四和40μL試劑五，混勻，記錄600nm處20s時吸光值A1和 1min20s後的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。

NOX活力單位的計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清（漿）NOX活力的計算:

單位的定義(yi) ：每mL血清（漿）在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A600變化0.01定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NOX（U/mL）＝ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T=2500×ΔA

2、組織、細菌或細胞中NOX活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A600變化0.01定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NOX（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每g組織在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A600變化0.01定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NOX（U/g 鮮重）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T=505×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A600變化0.01定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NOX（U/104 cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T=1.01×ΔA

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.25mL； V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，0.202 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量；500：細胞或細菌總數，500萬(wan) 。

b.使用96孔板測定的計算公式如下：

1、血清（漿）NOX活力的計算:

單位的定義(yi) ：每mL血清（漿）在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A600變化0.005定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NOX（U/mL）＝ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T=5000×ΔA

2、組織、細菌或細胞中NOX活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A600變化0.005定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NOX（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.005÷T=5000×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每g組織在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A600變化0.005定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NOX（U/g 鮮重）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T=1010×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A600變化0.005定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NOX（U/104 cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T=2.02×ΔA

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.25mL； V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，0.202 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量；500：細胞或細菌總數，500萬(wan) 。

paybet雷竞技

1. 國內(nei) 試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾(zhong) 多有名生命科學領域的研究試劑、儀(yi) 器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED Biosesystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosesolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產(chan) 品都提供售後服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為(wei) 客戶全麵解決(jue) 實驗、生產(chan) 、開發需求。公司整合國際與(yu) 國內(nei) 資源，加強網絡建設，提高公司內(nei) 部運作效率，為(wei) 客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為(wei) 客戶提供優(you) 惠的價(jia) 格。

NADH氧化酶（NADH oxidase，NOX）試劑盒