潮黴素B

潮黴素B/濕黴素乙/效高素/Hygromycin B

CAS:31282-04-9
分子式：C20H37N3O13  
分子量：527.52
純度：>90%
化學性質：白色至類白色粉末，易溶於(yu) 水、甲醇和乙醇。

用途：生化研究

作用機製：  

潮黴素B是由吸水鏈黴菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chan) 生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑製蛋白質合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮黴素B通過幹擾70S核糖體(ti) 易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑製蛋白合成。目前常用於(yu) 篩選和維持培養(yang) 含潮黴素抗性基因的原核或真核細胞。

抗性基因：

對潮黴素B的抗性源自編碼潮黴素B磷酸轉移酶（Hph）的基因。至今發現兩(liang) 種來源：

► Streptomyces hygroscopicus產(chan) 生的Hph抗性基因；

► Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae內(nei) 質粒攜帶的Hph抗性基因（常用）；  

生物應用：

1）   篩選和維持培養(yang) 穩定轉染Hph+載體(ti) 的原核細胞或真核細胞（植物細胞和哺乳動物細胞）；

2）   由於(yu) 作用模式的差異，常與(yu) G418 (GeneticinTM)，Zeocin™ 和blasticidin S聯合使用，篩選穩定轉染兩(liang) 個(ge) 不同載體(ti) 的細胞株；

3）抗病毒劑，由於(yu) 潮黴素B選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞，而且具有抑製翻譯的功效；

4）作為(wei) 驅蟲藥加入動物飼料；

應用濃度：

潮黴素B用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養(yang) 基，生長條件和細胞代謝率而變化。推薦使用濃度為(wei) 50-1000 μg/mL，*佳濃度需要殺滅曲線來確定。

哺乳動物細胞·200-500 μg/mL；細菌/植物細胞·100-300 μg/mL；真菌·300-1000 μg/mL；

產(chan) 品使用：

使用一：殺滅曲線確定*佳殺死濃度（僅(jin) 作參考，因個(ge) 人檢測體(ti) 係而異）

（1）往組織培養(yang) 級的96孔板內(nei) 加入未轉染細胞，細胞密度約50-200細胞/孔；細胞貼壁之後，往每孔加入含不同濃度（如50-1000μg/mL，至少5個(ge) 濃度）潮黴素B的200μL新鮮培養(yang) 基；

（2）37℃，5% CO2培養(yang) 箱孵育細胞10-14天；

（3）培養(yang) 5-7天後更換新的培養(yang) 液，培養(yang) 液內(nei) 含有相應濃度的潮黴素B；

（4）10-14天後使用細胞增殖方法如MTT，CCK-8等評估細胞活力；也可以通過檢測細胞克隆數或百分比匯合率來確定毒性效應。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細胞的*小濃度為(wei) *佳篩選濃度。

使用二：篩選穩定轉染細胞

（1）         對於(yu) 貼壁細胞，直接吸去60mm培養(yang) 皿內(nei) 的轉染細胞培養(yang) 基，然後加入含有潮黴素B的新鮮培養(yang) 基5-6ml；對於(yu) 懸浮細胞，無菌條件250x g,離心10min除去舊的轉染細胞培養(yang) 基，然後懸浮在約5ml的含潮黴素B的新鮮培養(yang) 基；

（2）         5-7天後，如上方法更換含有潮黴素B的新鮮培養(yang) 基；

（3）         再孵育細胞5-7天；

（4）         10-14天孵育後，培養(yang) 體(ti) 係中隻含有能夠表達潮黴素B抗性表型的活細胞。因此篩選之後如步驟一，更換不含潮黴素B的新鮮培養(yang) 基。

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