3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）

3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）

3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關(guan) 鍵酶，廣泛存在於(yu) 動植物和微生物體(ti) 內(nei) ，催化1，3-二磷酸甘油酸轉變為(wei) 3-磷酸甘油酸，產(chan) 生1分子ATP，具有影響DNA複製和修補及刺激病毒RNA合成等生物學功能，廣泛應用於(yu) 藥物靶標設計。

測定原理

3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產(chan) 生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產(chan) 生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm處的吸光度變化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

試劑組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×2瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 10mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨(lin) 用前加2mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融。

試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨(lin) 用前加1mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融。

試劑四：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨(lin) 用前加1 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融。

試劑五：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨(lin) 用前加4 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融。

酶液提取

①總PGK酶提取：建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液，冰浴勻漿後超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然後4℃，500g離心5min，取上清測定。

②胞漿和葉綠體(ti) PGK酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液），冰浴勻漿後於(yu) 4℃，500g離心5min，棄沉澱，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用於(yu) 測定胞漿PGK酶活性，取沉澱加1mL提取液，震蕩溶解後超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然後4℃，500g離心5min，取上清測定葉綠體(ti) 中PGK酶活性。

建議測定總PGK酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體(ti) 中的PGK，則按照步驟②提取粗酶液。

操作

1. 分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30min，調節波長至340nm，蒸餾水調零。

2. 取微量石英比色皿/96孔板，依次加入100μL試劑一，20μL試劑二，10μL試劑三，10μL試劑四，40μL試劑五，20μL粗酶液，充分混勻，記錄340nm處10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A1-A2

3. 
   

自備用品

天平、低溫離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板。

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3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）

• 中文名稱：甲泛葡胺

• 英文名稱：Metrizamide

分子式：C18H22I3N3O8

分子量：789.1

• CAS號：31112-62-6

  級別：Reagent Grade

• EINECS編號：250-475-5

• 儲(chu) 存條件：2～8℃

• 中文別名：甲泛葡胺、阿米派克、甲泛影酰胺、室椎影

• 英文別名：2-((3-(acetylamino)-5-(acetylmethylamino)-2,4,6-triiodobenzoyl)amino)-2-deox、2-(3-ace***ido-2,4,6-triiodo-5-(n-methylace***ido)benzamido)-2-deoxy-d-gluco

• 是否危險：否

• 
  

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甲泛葡胺/甲泛影酰胺/室椎影/阿米派克/造影胺/Metrizamide