綿羊5羥二十碳四烯酸(5-HETE)ELISA試劑盒

綿羊5羥二十碳四烯酸(5-HETE)ELISA試劑盒Sheep 5-hydroxyeicosatetraenoic acid,5-HETE ELISA kit英文縮寫(xie) ：5-HETE

安全性：

1）避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體(ti) ，請盡快用水衝(chong) 洗。

2）實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3）不要用嘴吸取試劑盒裏的任何成份。

操作注意事項：

1）試劑應按標簽說明書(shu) 儲(chu) 存，使用前恢複到室溫。稀稀過後的標準品應丟(diu) 棄，不可保存。

2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4）使用一次性的吸頭以免交叉汙染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5）使用幹淨的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品。

6）洗滌酶標板時應充分拍幹，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7）底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露於(yu) 光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成後應立即讀取OD值。

8）加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9）按照說明書(shu) 中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法：

1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nei) 毒素的試管。收集血液後，1000×g離心10分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用於(yu) 檢測。1000×g離心30分鍾去除顆粒。

3）細胞上清液---1000×g離心10分鍾去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鍾，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反複冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟：

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體(ti) 產(chan) 生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chan) 生加樣上的誤差。

2）根據待測樣品數量加上標準品的數量決(jue) 定所需的板條數。每個(ge) 標準品和空白孔建議做複孔。每個(ge) 樣品根據自己的數量來定，能使用複孔的盡量做複孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋後加入50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。

3）加入稀釋好後的標準品50ul於(yu) 反應孔、加入待測樣品50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。立即加入50ul的生物素標記的抗體(ti) 。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4）甩去孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5）每孔加入80ul的親(qin) 和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鍾。

6）甩去孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鍾。避免光照。

8）取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液後應立即測定結果。

9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

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