cisbio 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 細胞試劑盒

cisbio 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 細胞試劑盒

cisbio 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 細胞試劑盒

概述：磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 檢測能夠檢測組蛋白 H3 尾部的 Ser10 磷酸化，組蛋白 H3 是基因表達和有絲(si) 分裂的關(guan) 鍵調節因子。Ser10 的磷酸化與(yu) 有絲(si) 分裂和減數分裂期間的染色體(ti) 濃縮密切相關(guan) 。

磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 檢測可測量在 Ser10 位點磷酸化的組蛋白 H3。與(yu) Western Blot 不同，該檢測基於(yu) 平板，不需要凝膠、電泳或轉移。磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 檢測使用 2 種標記抗體(ti) ：一種帶有供體(ti) 熒光團，另一種帶有受體(ti) 。選擇第一種抗體(ti) 是因為(wei) 它能特異性結合蛋白質上的磷酸化基序，第二種是因為(wei) 它能夠獨立於(yu) 蛋白質的磷酸化狀態識別蛋白質。蛋白質磷酸化能夠形成涉及標記抗體(ti) 的免疫複合物，並使供體(ti) 熒光團靠近受體(ti) ，從(cong) 而產(chan) 生 FRET 信號。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 2 板檢測方案

2 板協議涉及在裂解前在 96 孔板中培養(yang) 細胞，然後將裂解物轉移到 384 孔低體(ti) 積檢測板，然後添加磷酸組蛋白 H3 (Ser10) HTRF 檢測試劑。該協議使細胞的生存能力和匯合度得到監測。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 1 板測定方案

使用 HTRF 試劑檢測磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 可以在用於(yu) 培養(yang) 、刺激和裂解的單個(ge) 板中進行。無需洗滌步驟。這種 HTS 設計的協議可實現小型化，同時保持穩健的 HTRF 質量。

HTRF 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 檢測與蛋白質印跡法的比較

將指數生長的 Hela 細胞培養(yang) 至 80% 匯合度，並用諾考達唑處理 16 小時。培養(yang) 基去除和裂解後，通過離心收集可溶性上清液。等量的裂解物用於(yu) WB 和 HTRF 的並排比較。HTRF 檢測的靈敏度是 Western Blot 的 25 倍。使用 HTRF 磷酸組蛋白 H3 (Ser10)，僅(jin) 256 個(ge) 細胞就足以進行最小信號檢測，而 Western Blot 信號則需要 6,400 個(ge) 細胞。HTRF 檢測的靈敏度是 Western Blot 的 25 倍。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 作為細胞增殖的有絲分裂生物標誌物

將 Hela 和 A431 細胞接種在 96 孔板中，並用 Nocodazole 處理 16 小時，Nocodazole 是一種抗有絲(si) 分裂劑，可解聚微管並在組蛋白 H3 Ser10 磷酸化達到最大時阻斷細胞有絲(si) 分裂。去除細胞培養(yang) 基後，加入 50 µl、100 µl 或 200 µl 裂解緩衝(chong) 液孵育 30 分鍾。將 16 µl 的每種裂解物轉移到 384sv 白板上進行 HTRF 分析。將裂解體(ti) 積增加至 200µl 可改善 HTRF 檢測信號的線性度。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 作為極光激酶 B 抑製的讀數

細胞周期中的磷酸組蛋白 H3-Ser10

總體(ti) 組蛋白磷酸化在細胞周期期間波動非常顯著，其特征在於(yu) 有絲(si) 分裂中絲(si) 氨酸 10 上組蛋白 H3 磷酸化的峰值。極光激酶 B 直接負責有絲(si) 分裂組蛋白 H3 Ser10 磷酸化。與(yu) BORA 複合的 Aurora 激酶 A 負責在 G2 期初始激活 PLK1，導致在 G2/M 轉換檢查點激活細胞周期蛋白依賴性激酶 1 有絲(si) 分裂進入。極光激酶 A 在人類癌症中經常被擴增，極光激酶 A 在人類腫瘤中的過度表達與(yu) 不良預後和基因組不穩定相關(guan) 。此外，極光激酶 B 的高表達水平與(yu) 膠質母細胞瘤、卵巢癌和肝細胞癌的不良預後相關(guan) 。