MagVigen™ – Plasma DNA Capture

產品內容

• MagVigen™ 血漿 DNA 捕獲納米顆粒

• 裂解緩衝(chong) 液

• 蛋白酶K

• 蛋白酶 K 緩衝(chong) 液

• 洗滌緩衝(chong) 液 1 庫存

• 洗脫緩衝(chong) 液

所需材料

• 異丙醇

• 乙醇

• 十二烷基硫酸鈉，20%

• 磁性架（NVIGEN Cat# A20006）

MagVigen™ 血漿 DNA 捕獲試劑盒 (K61003) 能夠從(cong) 血漿和血清中捕獲小的循環遊離 DNA (>30bp)。

Protocols

1. 準備血漿樣品：如果使用冷凍血漿，請在室溫下解凍。將血漿以 12000x g 離心 5 分鍾，以去除任何血液和細胞碎片。




2. 製備裂解緩衝(chong) 液：如果有固體(ti) ，則在 60°C 下加熱幾分鍾以製成澄清溶液。




3. 製備蛋白酶溶液：將蛋白酶 K 緩衝(chong) 液添加到蛋白酶 K 粉末瓶中。渦旋混合均勻。儲(chu) 存於(yu) -20°C。




4. 製備洗滌緩衝(chong) 液 1：根據表 1 計算所需量。向每 550 ul 洗滌緩衝(chong) 液 1 原液中添加 450 ul 異丙醇。每次都新鮮製作緩衝(chong) 液。




5. 檢查表1的總體(ti) 積來決(jue) 定使用的離心管類型（1.5ml、2ml、5ml、15ml或50ml）。




6. 將蛋白酶 K 溶液添加到樣品管底部，將血漿添加到管中。渦旋 5 秒以充分混合，短暫離心。




7. 將 20% SDS 添加到管中。渦旋 5 秒以充分混合，短暫離心。




8. 將裂解緩衝(chong) 液添加到管中。渦旋 1 分鍾以充分混合。短暫地旋轉下來。 60°C 孵育 30 分鍾。




9. 添加 MagVigen™ 血漿 DNA 捕獲納米顆粒。輕輕搖動小瓶使其分散。然後加入異丙醇，渦旋混勻，短暫離心，繼續渦旋 45 分鍾。




10. 將反應管放在磁力架上沉澱珠子，直至溶液澄清（10-20 分鍾，具體(ti) 取決(jue) 於(yu) 磁鐵的強度和樣品體(ti) 積）。




11. 慢慢除去上清液。小心不要帶走任何珠子，盡可能多地除去溶液。將磁力架敲擊固體(ti) 表麵，使殘留溶液沉降到管底，除去所有上清液。




12. 將管從(cong) 磁鐵上取下，添加洗滌緩衝(chong) 液 1。通過移液或渦旋混合。如果從(cong) 較大的 15 或 50 ml 試管開始，請將溶液轉移到 1.5 或 2 ml 試管中。短暫地旋轉下來。將珠子放在磁力架上沉澱（約 10 分鍾），除去上清液。將磁力架敲擊表麵。除去所有上清液。




13. 使用 75% 乙醇清洗珠粒。不需要全分散珠粒。管子可以通過磁力架保持在適當的位置。稍微向前和向後傾(qing) 斜裝有樣品管的磁力架。然後短暫旋轉，使蓋子中沒有溶液殘留。將珠子放在磁力架上（約 3 分鍾）並除去所有上清液。在固體(ti) 表麵上敲擊磁力架，使上清液殘留物沉降到管底部。除去所有上清液。




14. 使用 75% 乙醇再次清洗珠粒。將珠子沉澱（約 2-3 分鍾）並除去所有上清液。




15. 將管子放在磁力架上，風幹沉澱以蒸發所有乙醇。這需要 2-3 分鍾。




16. 將所需量的洗脫緩衝(chong) 液添加到珠子中，上下移液直至所有沉澱物全重新分散。將珠子分散在洗脫緩衝(chong) 液中 3 分鍾。




17. 短暫地旋轉下來。然後將管子放在磁力架上 2-3 分鍾。




18. 收集上清液，不要幹擾磁珠沉澱。上清液含有提取的DNA。吸取 DNA 溶液進行下遊實驗時，將管子放在磁鐵旁邊。提取的 cfDNA 溶液如果不立即使用，可保存在 -20°C。

MagVigen™ – Plasma DNA Capture