詳細介紹
品牌 | 基因美 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,製藥,綜合 |
大鼠Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA Kit,產(chan) 品編碼:JYM0413Ra
大鼠Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA Kit,Rat Collagen Type I (COL-1) ELISA Kit
【實驗方法】雙抗體(ti) 夾心法
【種屬】大鼠
【檢測範圍】 見說明書(shu)
【檢測波長】450 nm
【樣本類型】血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guan) 液體(ti) 樣本
【反應時間】 1.5~2h
大鼠Ⅰ型膠原(COL-1)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書(shu)
本試劑盒僅(jin) 供科研使用。
本試劑盒用於(yu) 體(ti) 外定量檢測大鼠血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guan) 液體(ti) 樣本中大鼠Ⅰ型膠原(COL-1)的含量。
有效期:6個(ge) 月
保存條件:2-8℃
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中大鼠Ⅰ型膠原(COL-1)水平。用純化的大鼠Ⅰ型膠原(COL-1)抗體(ti) 包被微孔板,製成固相抗體(ti) ,往包被單抗的微孔中依次加入大鼠Ⅰ型膠原(COL-1),再與(yu) HRP標記的大鼠Ⅰ型膠原(COL-1)抗體(ti) 結合,形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物,經過洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠Ⅰ型膠原(COL-1)呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠Ⅰ型膠原(COL-1)濃度。
試劑盒組成
樣本處理及要求
1.血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鍾,離心 20 分鍾左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉澱,應再次離心。
2. 血漿:應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為(wei) 抗凝劑,混合 10-20 分鍾後,離心 20 分鍾左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鍾左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yang) 上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nei) 的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬(wan) /ml 左右。通過反複凍融,以使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份。離心 20 分鍾左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本後,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鍾左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。分裝後一份待檢測,其餘(yu) 冷凍備用。
6. 標本采集後盡早進行提取,提取按相關(guan) 文獻進行,提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放於(yu) -20℃保存,但應避免反複凍融.
7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,因NaN3 抑製辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.標準品的稀釋與(yu) 加樣:在酶標包被板上設標準品孔 10 孔,在第一、第二孔中分別加標準品 100μl,然後在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;然後從(cong) 第一孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻後從(cong) 第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混勻後從(cong) 第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻後從(cong) 第九第十孔中各取 50μl 棄掉。(稀釋後各孔加樣量都為(wei) 50μl,濃度分別為(wei) 7.2ng/ml,4.8ng/ml,2.4 ng/ml,1.2ng/ml, 0.6ng/ml)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘(yu) 各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為(wei) 5 倍)。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 加酶:每孔加入酶標試劑 50ul,空白孔除外。
4. 溫育:用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾。
5. 配液:將 30(48T 的 20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T 的 20 倍)倍稀釋後備用。
6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體(ti) ,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒後棄去,如此重複 5 次,拍幹。
7. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50ul,再加入顯色劑 B50ul,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 10 分鍾.
8. 終止:每孔加終止液 50ul,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
9. 測定:以空白孔調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液後 15分鍾以內(nei) 進行。
注意事項
1. .試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後方可使用,酶標包被板開封後如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控製在 5 分鍾內(nei) ,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做複孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD值大於(yu) 標準品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)後再測定,計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜隻限一次性使用,以避免交叉汙染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與(yu) 英文說明書(shu) 有異,以英文說明書(shu) 為(wei) 準。
計算
以標準物的濃度為(wei) 橫坐標,OD 值為(wei) 縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與(yu) OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為(wei) 樣品的實際濃度。
試劑盒性能
1.樣品線性回歸與(yu) 預期濃度相關(guan) 係數 R 值為(wei) 0.92 以上。
2.批內(nei) 與(yu) 批間應分別小於(yu) 9%和 15%
檢測範圍
0.12pg/ml -8pg/ml
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