PolyShooter siRNA/miRNA 轉染試劑，產(chan) 品編碼：P09410。

PolyShooter siRNA/miRNA 轉染試劑

PolyShooterTM INTERFERE

Transfection Reagent

For the transfection of siRNA/miRNA into animal cells

Catalog Number：P09410

01/產(chan) 品概述

　　RNA幹擾（RNAinterference，RNAi）是近年來生命科學領域十分重大的發現之一，它是指小分子雙鏈RNA可以特異性地降解同源mRNA，從(cong) 而抑製或關(guan) 閉特定基因表達的現象。人們(men) 隻要知道了某種疾病的致病基因，就可以設計出針對該基因mRNA的小分子幹擾RNA（SmallinterferingRNA，siRNA），抑製或封閉該致病基因的表達，從(cong) 而達到治療疾病的目的。由於(yu) 使用RNAi技術可以特異性剔除或關(guan) 閉特定基因的表達，所以該技術已被廣泛用於(yu) 探索基因功能和傳(chuan) 染性疾病及惡性腫瘤等基因治療領域。RNAi是目前尤為(wei) 熱門的生命科學研究領域，也是未來有發展前途的新藥開發領域。除此之外，RNAi技術還可以廣泛應用於(yu) 農(nong) 業(ye) 、林業(ye) 、畜牧業(ye) 和漁業(ye) 等多種領域，進行良種培育、良種篩選和疾病治療等。

　　 siRNA/miRNA導入有以下幾種方法∶化學轉染技術、電穿孔法、磷酸鈣共沉澱技術、顯微注射和載體(ti) 導入技術。由於(yu) 電轉的方法對細胞損傷(shang) 比較大，一般不建議選擇電轉。化學轉染技術是目前最為(wei) 常用的方法，化學轉染能否成功的關(guan) 鍵在於(yu) 轉染試劑的選擇。

　　 PolyShooter siRNA/miRNA 轉染試劑 P09410，即PolyShooter INTERFERE Transfection Reagent是一種基於(yu) 陽離子高分子聚合物的新型轉染試劑，適用於(yu) siRNA和miRNA的轉染。其原理為(wei) 帶正電的高分子聚合物與(yu) siRNA/miRNA帶負電的磷酸基團形成帶正電的複合物後，與(yu) 細胞表麵帶負電的蛋白多糖相互作用，並通過內(nei) 吞作用進入細胞，形成內(nei) 含體(ti) 。該轉染試劑具有質子海綿的作用，能夠吸收溶酶體(ti) 中的H+，質子的不斷流入導致複合體(ti) 腫脹破裂，從(cong) 而使外源siRNA或miRNA釋放到細胞質中，實現siRNA/miRNA的細胞轉染。

　　PolyShooter siRNA/miRNA 轉染試劑 P09410 對多種常見細胞具有高水平轉染效率，具有高效低毒、操作簡單、重複性好等優(you) 點，適用siRNA/miRNA介導的基因抑製實驗。其*的配方使其轉染後無明顯細胞毒性，因此無需去除轉染試劑-核酸複合物或更換新鮮培養(yang) 基，也可根據具體(ti) 情況優(you) 化轉染體(ti) 係。

02/產(chan) 品組分

03/保存條件

冰袋（wetice）運輸。4℃保存，有效期6個(ge) 月。-30℃至-10℃保存，有效期12個(ge) 月，避免反複凍融。

04/產(chan) 品特點

　　轉染效率高——針對廣泛類型的細胞，均表現出優(you) 秀的轉染效率，基因抑製效果好，脫靶效應低

　　細胞毒性低——作用溫和，能較好地實現高轉染效率與(yu) 低細胞毒性之間的平衡

　　適用範圍廣——可用於(yu) 多種細胞類型，適合siRNA/miRNA介導的基因抑製實驗

　　操作簡單——簡單快速的實驗方案，可獲得穩定的結果，且轉染後無需去除複合物或更換新鮮培養(yang) 基

05/適用範圍

　　LeapWal PolyShooter siRNA/miRNA 轉染試劑是一種基於(yu) 陽離子高分子聚合物的新型轉染試劑，適用於(yu) siRNA和miRNA的轉染。

06/實驗流程概要

07/實驗步驟（以24孔板為(wei) 例，其他培養(yang) 板加樣體(ti) 積參考表一：轉染量度標準）

1: 準備待轉染細胞

貼壁細胞：轉染前一天，將胰酶消化後的細胞按照每孔0.1-1x105個(ge) 細胞的量進行鋪板，使其在轉染時密度為(wei) 30%-40%。

懸浮細胞：轉染當天，配製轉染試劑-核酸複合物之前，在24孔板中進行細胞鋪板，每500 µL生長培養(yang) 基中加入0.5-2.5x105個(ge) 細胞。

Ø 細胞狀態會(hui) 極大影響轉染效率，待轉染細胞應處於(yu) 良好生長狀態，建議使用生長處於(yu) 指數期、存活率大於(yu) 90% 的細胞進行轉染。

2: 準備PolyShooterTM INTERFERE轉染試劑-核酸複合物

（1）取1 μL siRNA (20 μM，DEPC水溶解) 加入到1.5 mL離心管中，加入2 μL PolyShooterTM INTERFERE轉染試劑與(yu) siRNA混合，室溫孵育3分鍾。

Ø 基因性質、細胞類型、siRNA效價(jia) 、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周轉率等因素均會(hui) 影響siRNA的轉染效率，建議選取siRNA作用濃度在10-100 nM之間，轉染試劑的體(ti) 積應根據siRNA濃度和培養(yang) 皿的大小進行調整，請參見表一。

（2）往上述混合物中加入100 μL Opti-MEMTM I減血清培養(yang) 基（無血清無雙抗），輕輕混勻，在室溫下靜置30分鍾，形成轉染試劑-核酸複合物。

3: siRNA細胞轉染

30分鍾後，將上述100 µL轉染試劑-核酸複合物加入每孔細胞，輕輕搖動培養(yang) 板混勻。

4. 分析轉染細胞的基因幹擾效率

轉染細胞培養(yang) 24-48小時後，可根據實際情況用RT-PCR、Western Blot、ELISA、熒光檢測法、流式細胞術、報告基因等檢測基因幹擾效果，或進行後續功能實驗。

Ø 該轉染試劑也適合轉染miRNA，具體(ti) 操作請參考siRNA的操作流程。

表一：轉染量度標準

08/注意事項

1.核酸質量：確保siRNA/miRNA是經過PAGE純化和脫鹽處理的，高純度的siRNA/miRNA有助於(yu) 獲得較高的轉染效率。

2.細胞質量：細胞狀態會(hui) 極大影響轉染效率，建議使用生長處於(yu) 指數期、存活率大於(yu) 90%的細胞進行轉染。

3.細胞密度：建議細胞傳(chuan) 代後12-24h內(nei) 、細胞密度為(wei) 30%-40%時進行轉染。不同的細胞轉染實驗，對細胞密度的要求不盡相同。在進行不同核酸或不同細胞係的轉染時，需要根據說明書(shu) 再次優(you) 化實驗條件。此外，在實驗過程中保證相同的接種條件，確保實驗數據的可重複性。

4. siRNA與(yu) 轉染試劑使用比例：對於(yu) 大多數細胞係而言，轉染複合物中siRNA (μL of 20 μM Stock)與(yu) PolyShooterTM INTERFERE Transfection Reagent (μL) 的比例在1：1至1：3之間，推薦比例為(wei) 1:2。想要獲得理想的基因幹擾結果，需要對這一比例進行優(you) 化，根據所轉染細胞及siRNA選擇適合的轉染比例。

5. 由於(yu) 一些特殊培養(yang) 基中的某些成分可能會(hui) 抑製陽離子聚合物介導的轉染，因此有必要檢測特殊培養(yang) 基與(yu) PolyShooterTM INTERFERE Transfection Reagent的相容性。

6. 轉染前，確保siRNA/miRNA基因沉默表達不會(hui) 影響細胞活力。

7. 您需要設計針對目的基因的若幹siRNA（小幹擾RNA），並評估其效價(jia) 。

8. 整個(ge) 實驗過程使用無RNA酶和無熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩衝(chong) 液。

9. 為(wei) 了您的健康安全，請規範操作，穿戴實驗服與(yu) 手套開展實驗。

10. 本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及治療。

09/實驗案例分析

1: 轉染前一天，將穩定表達GFP的HeLa細胞接種於(yu) 24孔板，使其在轉染時密度為(wei) 30%。

2: 按照每孔計量，取1μL siRNA(GFP/NC, 20 μM)加入到1.5 mL離心管中，再加入2 μL PolyShooterTM INTERFERE Transfection Reagent與(yu) siRNA進行混合，室溫孵育3 min。

3: 往上述混合物中加入100 μL Opti-MEMTM I減血清培養(yang) 基（不含血清不含雙抗），輕輕混勻，在室溫條件下靜置30 min，形成PolyShooterTM INTERFERE轉染試劑-核酸複合物。

4: 30分鍾後，將上述100 µL轉染試劑-核酸複合物加入每孔細胞，輕輕搖動培養(yang) 板混勻。

5: siRNA轉染細胞24小時後，用熒光顯微鏡及流式細胞儀(yi) 檢測GFP綠色熒光蛋白幹擾效果，實驗結果如圖2所示。

6: 說明：此次實驗選擇商業(ye) 化的 siRNA轉染試劑RNAiMAX作為(wei) 對照組，RNAiMAX的具體(ti) 實驗操作按照其說明書(shu) 進行。簡單來說：在不含抗生素的50 μL 無血清Opti-MEM 培養(yang) 基中稀釋1μL siRNA(GFP, 20 μM)，輕輕混勻。然後，在不含抗生素的50 μL 無血清Opti-MEM 培養(yang) 基中稀釋1μL RNAiMAX，輕輕混勻。將稀釋的siRNA與(yu) 稀釋的RNAiMAX輕輕混合，在室溫下孵育20分鍾。將混合物添加到細胞中，其終體(ti) 積為(wei) 600μL。siRNA轉染細胞24小時後，用熒光顯微鏡及流式細胞儀(yi) 檢測GFP綠色熒光蛋白幹擾效果。

圖2: siRNA轉染細胞24 h後，熒光顯微鏡(A)及流式細胞儀(yi) (B)檢測GFP幹擾效果

10/其他相關(guan) 產(chan) 品

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