PolyShooter NEO-PEI DNA 轉染試劑，產(chan) 品編碼：P09310-500。

PolyShooter NEO-PEI DNA 轉染試劑

PolyShooterTM

NEO-PEI Transfection Reagent

DNA transfection reagent for large scale recombinant protein expression and virus production

Catalog Number：P09310

01/產(chan) 品概述

PEI是基因轉染中常用的高分子載體(ti) ，同時也是基因轉染的“金標準"。PEI轉染的原理是帶正電的陽離子聚合物與(yu) 核酸中帶負電的磷酸基團形成帶正電的複合物後，再與(yu) 細胞表麵帶負電的蛋白多糖相互作用，通過細胞胞吞進入細胞。PEI主鏈上每三個(ge) 原子就含有一個(ge) 氮原子，因此具有較高的陽離子密度，這對於(yu) 結合帶負電荷的核酸分子是非常有利的。在生理pH條件下，PEI部分胺基被質子化，隨著體(ti) 係pH值的降低，PEI剩餘(yu) 的胺基被質子化，從(cong) 而賦予了其出色的核酸結合能力和質子緩衝(chong) 能力，有利於(yu) 通過質子海綿效應從(cong) 內(nei) 涵體(ti) 逃逸。但是，PEI高的陽離子電荷密度，導致其嚴(yan) 重的細胞毒性。同時，PEI 25K含有4%-11％的殘留丙酰基，這可能阻礙聚合物主鏈與(yu) DNA的有效結合，影響基因轉染效率。因此，針對PEI的研究工作主要聚焦在通過功能化修飾以及脫丙酰基，來提高轉染效率、降低細胞毒性。

LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉染試劑是一種基於(yu) 分子量25 kDa PEI的DNA轉染試劑。通過對PEI進行功能改性，NEO-PEI 丙酰基*脫落，顯著改善了PEI的基因遞送性能，表現出較好的穩定性和較低的細胞毒性。PolyShooter NEO-PEI與(yu) PEI 25000轉染試劑相比，具有很多優(you) 點。包括：

1. PolyShooter NEO-PEI為(wei) 即用型轉染試劑，無需配置，可直接用於(yu) 細胞轉染實驗，而PEI 25000需要先把水調成弱酸性助其溶解，溶解後再用NaOH把pH調至中性，配置過程繁瑣複雜，容易引入誤差導致轉染效果不穩定。PEI 40000雖然較PEI 25000更易溶解，但也同樣存在配置繁瑣，配置過程中容易引入誤差的風險。

2. PEI 25000含有4%-11%的丙酰基殘留，丙酰基會(hui) 阻止聚合物主鏈與(yu) DNA結合，影響轉染效果。相較於(yu) PEI 25000，PolyShooter NEO-PEI丙酰基*脫落，因此其性能始終高效如一。

LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉染試劑是一種功能強大、值得信賴且經濟實惠的瞬時轉染試劑，廣泛適用於(yu) 多種細胞係，包括HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和HeLa細胞等。同時，PolyShooter NEO-PEI轉染試劑在大規模重組蛋白表達和病毒生產(chan) 等領域有著高效、低毒、穩定、可靠等顯著優(you) 勢。PolyShooter NEO-PEI提供從(cong) 96孔板到200L生物反應器持續的高表達轉染體(ti) 係，實現從(cong) 新藥研發到工業(ye) 化生產(chan) 的輕鬆過度。與(yu) 大多數細胞轉染方案相比，使用PolyShooter NEO-PEI既能得到穩定的基因表達效率，又可顯著降低轉染成本。

02/產(chan) 品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運輸。4℃保存，有效期6個(ge) 月。-30℃至-10℃保存，有效期12個(ge) 月，避免反複凍融。

04/產(chan) 品特點

v 易於(yu) 使用——即用型轉染試劑，無需配置，可直接用於(yu) 細胞轉染實驗

v 轉染效率高——針對多種類型細胞，均表現出優(you) 秀的轉染效率和高重組蛋白表達

v 細胞毒性低——作用溫和，能更好地實現高轉染效率與(yu) 低細胞毒性之間的平衡

v 性能更穩定——丙酰基*脫落，性能始終高效如一

v 高性價(jia) 比——既能得到穩定的基因表達效率，又可顯著降低轉染成本

v 化學成分明確，不含動物來源成分

05/適用範圍

PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent廣泛適用於(yu) 多種細胞係的DNA轉染，可應用於(yu) 大規模重組蛋白表達和病毒生產(chan) 等領域。本試劑提供從(cong) 96孔板到200L生物反應器持續的高表達轉染體(ti) 係，實現從(cong) 新藥研發到工業(ye) 化生產(chan) 的輕鬆過度。

06/實驗流程概要

圖1: PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent轉染實驗流程圖

07/實驗步驟（以24孔板為(wei) 例，其他培養(yang) 板加樣體(ti) 積參考表一：轉染量度標準）

1: 準備待轉染細胞

貼壁細胞：轉染前一天，將消化後的細胞按照每孔0.3-2x105個(ge) 細胞的量進行鋪板，使其在轉染時密度為(wei) 60%-70%。

懸浮細胞：轉染當天，配製轉染試劑-核酸複合物之前，在24孔板中進行細胞鋪板，每500 µL生長培養(yang) 基中加入2-5x105個(ge) 細胞。

Ø 細胞狀態會(hui) 極大影響轉染效率，待轉染細胞應處於(yu) 良好生長狀態，建議使用生長處於(yu) 指數期、存活率大於(yu) 90% 的細胞進行轉染。

2: 準備PolyShooter NEO-PEI轉染試劑-核酸複合物

（1）取1 μg質粒加入到1.5 mL離心管中，加入2.5 μL* PolyShooter NEO-PEI轉染試劑與(yu) 質粒混合，室溫孵育3分鍾。

Ø * PolyShooter NEO-PEI轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，通常情況下，DNA（μg）和PolyShooter NEO-PEI轉染試劑（μL）的推薦使用比例為(wei) 1：2.5。建議初次使用時，可在1：1-1：5的範圍內(nei) 調整以優(you) 化轉染效果。

（2）往上述混合物中加入100 μL無血清基礎培養(yang) 基1（與(yu) 培養(yang) 體(ti) 係一致，且無血清無雙抗），輕輕混勻，在室溫下靜置30分鍾，形成轉染試劑-核酸複合物。

Ø PolyShooter NEO-PEI轉染試劑-核酸複合物在室溫下4個(ge) 小時內(nei) 保持穩定。

（3）30分鍾後，往轉染試劑-核酸複合物中加入150 μL無血清基礎培養(yang) 基2（與(yu) 培養(yang) 體(ti) 係一致，且無血清無雙抗）稀釋複合物。

3: 細胞轉染

棄去細胞培養(yang) 基，將上述250 µL轉染試劑-核酸複合物加入每孔細胞，轉染4-16小時後，給細胞補充新鮮生長培養(yang) 基500 µL/孔。

4: 分析轉染細胞

轉染細胞培養(yang) 36-48小時後，可根據實際情況用熒光檢測法、Western Blot、RT-PCR、ELISA、流式細胞術、報告基因等檢測轉染效果，或加入篩選藥物進行穩定細胞株的篩選。

表一：轉染量度標準

08/注意事項

1: 核酸質量：想要獲得最高的轉染效率和更低的細胞毒性，應選用高純度、無菌、無汙染、無內(nei) 毒素的優(you) 質核酸。質粒中的內(nei) 毒素是轉染的大敵，內(nei) 毒素會(hui) 導致轉染效率顯著下降。推薦使用無內(nei) 毒素質粒抽提試劑盒進行質粒提取，保證質粒A260/A280比值為(wei) 1.8-2.0。同時，需合理計算質粒用量，轉染過量的質粒可能會(hui) 導致細胞毒性甚至死亡；

2: 細胞質量：細胞狀態會(hui) 極大影響轉染效率，建議使用生長處於(yu) 指數期、存活率大於(yu) 90%的細胞進行轉染；

3: 細胞密度：建議細胞傳(chuan) 代後12-24 h內(nei) 、細胞密度為(wei) 60%-70% 時進行轉染。不同的細胞轉染實驗，對細胞密度的要求不盡相同。在進行不同核酸或不同細胞係的轉染時，需要根據說明書(shu) 再次優(you) 化實驗條件。此外，在實驗過程中保證相同的接種條件，確保實驗數據的可重複性；

4: 質粒與(yu) 轉染試劑使用比例：對於(yu) 大多數細胞係，轉染複合物中DNA (μg)與(yu) PolyShoote NEO-PEI Transfection Reagent (μL) 的比例在1：1至1：5之間，推薦比例為(wei) 1:2.5。想要獲得*的轉染結果，需要對這一比例進行優(you) 化，根據所轉染細胞及質粒選擇適合的轉染比例；

5: PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent也可用於(yu) 有血清培養(yang) 基的轉染，但通過我們(men) 實驗室的測試，我們(men) 認為(wei) 體(ti) 係中血清的存在會(hui) 對轉染效果有一定程度的幹擾，所以，為(wei) 了追求更高效的轉染效率，我們(men) 更推薦使用無血清轉染法（即“07/實驗步驟"中敘述的轉染方法）；

6: 由於(yu) 一些特殊培養(yang) 基中的某些成分可能會(hui) 抑製陽離子聚合物介導的轉染，因此有必要檢測特殊培養(yang) 基與(yu) PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent的相容性；

7: 為(wei) 了您的健康安全，請規範操作，穿戴實驗服與(yu) 手套開展實驗；

8: 本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及治療。

09/實驗案例分析

1: 轉染前一天，將圖2所示3種狀態良好的細胞接種於(yu) 24孔板，使其在轉染時密度為(wei) 60%-70%。

2: 按照每孔計量，取1μg GFP質粒加入到1.5 mL離心管中，PolyShooter NEO-PEI組（圖2上）加入2.5 μL PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent與(yu) 質粒混合，PEI組（圖2下）加入2.5 μL PEI 25k與(yu) 質粒混合。室溫孵育3分鍾後，往混合物中加入100 μL無血清基礎DMEM培養(yang) 基，輕輕混勻，在室溫下靜置30分鍾，形成轉染試劑-核酸複合物。

3: 孵育30分鍾後，往轉染試劑-核酸複合物中加入150 μL無血清基礎DMEM培養(yang) 基稀釋複合物。

4: 將細胞培養(yang) 基棄去，加入上述250 µL 轉染試劑-核酸複合物。

5: 轉染12小時後，給細胞補充新鮮生長培養(yang) 基500 µL/孔。

6: 轉染細胞培養(yang) 48小時後，用熒光顯微鏡檢測GFP綠色熒光蛋白表達情況，並拍照記錄，實驗結果如圖2所示。

圖2: 轉染細胞48小時後，用熒光顯微鏡檢測GFP綠色熒光蛋白表達情況

10/其他相關(guan) 產(chan) 品

paybet雷竞技

1. 國內(nei) 試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾(zhong) 多有名生命科學領域的研究試劑、儀(yi) 器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED Biosesystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosesolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產(chan) 品都提供售後服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為(wei) 客戶全麵解決(jue) 實驗、生產(chan) 、開發需求。公司整合國際與(yu) 國內(nei) 資源，加強網絡建設，提高公司內(nei) 部運作效率，為(wei) 客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為(wei) 客戶提供優(you) 惠的價(jia) 格。

雙雙寬迷你垂直係統 CE，2 位。 雙倍容量標準尺寸的雙單元，運行相當於(yu) 4 標準迷你凝膠。 包括 2 個(ge) 您選擇的梳子，2 個(ge) 玻璃板套，2 個(ge) 墊片套，2 個(ge) 用於(yu) 鑄造的凝膠包裹墊圈。玻璃板尺寸為(wei) 20 厘米 x 10 厘米（h）。 對於(yu) 迷你 SDS PAGE，迷你二維電泳。