試劑盒裏有什麽(me) :

試劑盒含量(10個(ge) 反應或25個(ge) 反應):

TGIRT^® -III enzyme, 1 x 10  M l (KTGIRT-10) or 3 x 10  M l (KTGIRT-25)

10XPrimer混合物,50  M l (PM-110)

10 x DTT, 50  M l (D-121)

5x反應緩衝(chong) 區,100  M l (RX-120)

• TGIRT^® -III enzyme ,a  RNA和DNA寡核苷酸的混合 （可退火 形成含有R2RNA/R2R異型基因的  第一個(ge) 適配器序列 ,  dithiothreitol (DTT) ,以及  反應緩衝(chong) 區 去執行 ^® 照明rnan及sdnaa-seq分析的模板轉換應。 這個(ge) 工具包能夠與(yu) 第一個(ge) rna-後續適配器無縫連接到cDNA的5'端,合成rna模板的cDNA副本。為(wei) 香港及香港的  DNA寡核苷酸 (單獨購買(mai) )  第二組子適配器序列 必須加到CDNA的3'端  5'微生物/RNA連接酶 (新英格蘭(lan) 生物學家;M019或M0319L)在PCR擴增之前。

可以做什麽(me) 實驗？

1.全麵的鏈特異性轉錄組分析。8

2.全細胞、胞外體(ti) 、血漿和其他無細胞RNA的RNA序列7，8，15

3.miRNA、tRNA和其他非編碼小RNA的分析1-9，12，15

4.RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP和CRAC用於(yu) 表征RNA-蛋白質相互作用和核糖體(ti) 圖譜。1，10，115

5.通過高通量測序鑒定RNA堿基修飾。4，5，13，14

6.單鏈DNA-序列16

7.FFPE腫瘤樣本分析(谘詢InGex技術支持)。

以下是您應該使用TGIRT的原因:

比逆轉錄病毒逆轉錄酶具有更高的熱穩定性、持續能力和保真度，允許從(cong) 高度結構化和/或高度修飾的RNAs(例如tRNAs)和含有富含GC重複擴增的RNAs進行全長、端到端的cDNA合成。1-9，12，15，17
新的端到端模板轉換活性，能夠在逆轉錄過程中連接RNA-seq或PCR接頭，並且不需要單獨的拖尾或RNA 3’-接頭連接步驟。1與(yu) 使用隨機六聚體(ti) 引物或使用RNA連接酶進行接頭連接的程序相比，這種模板轉換活性極大地促進了鏈特異性RNA-seq文庫的構建，偏差更小。1，7，8
能夠從(cong) 低至2 ng的RNA輸入中產(chan) 生全麵的圖譜。7，15
從(cong) RNA模板到PCR產(chan) 物的RNA-seq文庫構建需要不到5小時。7，8，15
TGIRT更適合通過tgi rt-模板轉換構建RNA-seq文庫:

1.全麵的鏈特異性轉錄組分析。

去核糖的片段化通用人類參考RNA樣品的TGIRT -seq概括了人類轉錄物和刺突蛋白的相對豐(feng) 度，與(yu) 非鏈特異性TruSeq v2相當，且優(you) 於(yu) 鏈特異性Tru-Seq v3。TGIRT -seq比TruSeq v3具有更強的鏈特異性，並消除了TruSeq固有的隨機六聚體(ti) 引發的取樣偏差。與(yu) TruSeq相比，TGIRT -seq顯示了更均勻的5’至3’基因覆蓋範圍，並識別了更多的剪接點。TGIRT -seq能夠在相同的RNA-seq中同時分析mrna和lncRNAs，作為(wei) 結構化的小ncRNAs，包括trna，它們(men) 基本上不存在於(yu) TruSeq數據集。8

2.人類全細胞、胞外體(ti) 、血漿和其他細胞外RNA序列。

快速處理時間(通過PCR步驟構建RNA-seq文庫< 5小時)；需要少量RNA(低ng範圍)；全麵的轉錄譜，包括mRNAs和lncRNAs以及小ncrna，包括tRNAs、前miRNAs和其他結構化小ncrna的全長閱讀；不需要RNA連接酶；與(yu) 常規方法相比，偏差更小，效率更高，鏈特異性更強。7，8，15

3.高度結構化和/或高度修飾的RNA模板的RNA-seq。

更高的熱穩定性、持續加工性和鏈置換使得獲得tRNAs和其他結構化/修飾的小ncRNAs的全長、端到端cDNAs成為(wei) 可能，這些小ncRNAs對逆轉錄病毒RTs.4-9，12-15是不可抵抗的。

4.在諸如RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP、CRAC、核糖體(ti) 分析等方法中通過TGIRT模板轉換構建RNA-seq文庫。

快速處理時間(通過PCR步驟構建RNA-seq文庫< 5小時)；需要少量RNA(低ng範圍)；不需要RNA連接酶，操作步驟更少，偏差更小，效率更高。1，10，11

5.人血漿和大腸杆菌基因組DNA的ssDNA序列。

通過直接在DNA鏈的3’端啟動DNA合成，同時連接DNA-seq銜接子，無需末端修複、加尾或連接，以更簡單的工作流程捕獲精確的DNA末端。能夠分析核小體(ti) 定位、轉錄因子結合位點、DNA甲基化位點和來源組織。

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