PRECICE® ADK Assay Kit——novocib

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NOVOCIB位於(yu) 法國,公司基於(yu) 核苷酸代謝檢測技術,為(wei) 生命科學科研用戶及食品質量檢測研究、製藥企業(ye) ,提供的酶相關(guan) 檢測試劑。公司擁有專(zhuan) 門用於(yu) 核苷酸代謝檢測、重組蛋白酶分析及酶檢測試劑研究的PRECICE®檢測分析平台,實驗試劑及科研服務涉及分析領域。

人腺苷激酶的高通量測定

PRECICE ^® ADK 檢測試劑盒為(wei) ADK 活性的體(ti) 外測量和新型 ADK 抑製劑的藥物發現 提供了一種方便、高通量兼容且非放射性的檢測方法。用於(yu) 藥物發現的新工具，該試劑盒允許 HTS 搜索新的 ADK 抑製劑。

原理：
腺苷激酶使用ATP作為(wei) 磷酸供體(ti) 。它將 ATP 的末端磷酸基團轉移到底物上，產(chan) 生 ADP 作為(wei) 副產(chan) 物。該測定基於(yu) 使用肌苷作為(wei) 替代 ADK 底物和涉及高活性 IMPDH（肌苷一磷酸脫氫酶）的偶聯反應，用於(yu) 直接測量由 ADK 形成的肌苷一磷酸 (IMP)。在肌苷和ATP存在下，ADK催化肌苷磷酸化形成IMP和ADP。然後在 NAD 存在下，IMP 立即被高活性 IMPDH 氧化為(wei) XMP，從(cong) 而形成 NADH ₂。

ADK在人體中的作用

腺苷激酶是一種普遍存在的酶，可調節腺苷 (AR) 的細胞內(nei) 和細胞外濃度，腺苷是中樞神經係統功能的重要調節劑，也是參與(yu) 缺氧、炎症和傷(shang) 害感受的信號分子。與(yu) 腺苷脫氨酶一起，腺苷激酶調節細胞內(nei) 和細胞外的腺苷濃度。腺苷激酶的抑製導致局部腺苷濃度的選擇性增加和體(ti) 內(nei) 癲癇發作易感性和傷(shang) 害感受的降低⁽³⁾。ADK 功能障礙涉及多種病理，包括糖尿病⁽¹³⁾、癲癇⁽⁶⁾和癌症。因此，ADK 成為(wei) 一種合理的治療靶點，腺苷調節藥物已被廣泛應用。測試⁽¹⁾作為(wei) 新的鎮痛劑和抗炎劑⁽⁴⁾治療精神分裂症⁽⁷⁾或限製缺血性中風後的腦損傷(shang) ⁽⁸⁾。

驗證

使用化合物 A-134974（一種已知的 ADK 抑製劑（Sigma-Aldrich，已獲得 Abbott Laboratories 的許可））驗證了使用PRECICE® ADK Screening Assay Kit篩選 ADK 抑製劑和 IC50 測量。Z'-Factor 由 44 個陰性（無 ADK 抑製）和陽性（用 500nM A-134974 抑製 ADK）計算得出，測量結果為 0.68，這是篩選試驗的出色性能水平

化合物 A-134974 在 12 種不同濃度下的 ADK 抑製曲線。
所有數據點代表 8 個孔的平均值 (+/-SD)（2 個孔 - 重複 - 在 4 個獨立的板上）。IC ₅₀通過用最小二乘法擬合數據的4參數非線性曲線來確定。進行 IMPDH 活性測定以確認 IMPDH 不被化合物 A-134974 抑製（數據未顯示）。

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