常用生化試劑Invitrogen 15596-026

常用生化試劑Invitrogen 15596-026

TriZol試劑是一種完整、即用型試劑，可從(cong) 多種生物樣品中分離高質量總 RNA 或同時分離 RNA、DNA 和蛋白。該苯酚和異硫氰酸胍的單相溶液設計用於(yu) 在一小時內(nei) 從(cong) 人、動物、植物、酵母菌或細菌來源的細胞和組織樣品中分離 RNA、DNA 和蛋白的單獨組分。

TriZol試劑的主要特點包括：

• 可從(cong) 同一樣品中分離 RNA、DNA 和蛋白

• 擁有強的裂解能力，甚至可處理困難的樣品類型

• 針對組織、細胞、血清、病毒和細菌進行優(you) 化的配方和方案

從(cong) 多種樣品體(ti) 積和來源中可靠純化 RNA

TRIzol™ 試劑可很好地處理少量組織 (50–100 mg) 和細胞 (5 × 106) 以及大量組織 (≥1 g) 和細胞 (>107)，且包含用於(yu) 從(cong) 人、動物、植物或細菌來源的樣品中進行純化的方案。TRIzol™ 試劑通過在樣品均質化期間高效抑製 RNase 活性維持 RNA 的完整性，同時破壞細胞並溶解細胞組分。TRIzol™ 試劑方法的簡單性使其可同時處理大量樣品。可在不到 1 小時的時間內(nei) 完成整個(ge) 程序。通過 TRIzol™ 試劑分離的總 RNA 不含蛋白和 DNA 汙染。

其配方可分離多種分子靶標

TRIzol™ 試劑可使您連續沉澱單份樣品中的 RNA、DNA 和蛋白。使用 TRIzol™ 試劑均質化樣品後，加入氯仿，使勻漿分離成透明的上層水層（含 RNA）、中間相和紅色下層有機層（含 DNA 和蛋白）。使用異丙醇從(cong) 水層中沉澱出 RNA。使用乙醇從(cong) 中間相/有機層中沉澱出 DNA。通過異丙醇沉澱從(cong) 苯酚-乙醇上清液中沉澱出蛋白。將沉澱出的 RNA、DNA 或蛋白洗滌以去除雜質，然後重懸以用於(yu) 下遊應用。

產(chan) 品名稱：Invitrogen TRIZOL、Trizol Reagent、一步法總RNA提取試劑

品牌：Invitrogen 

貨號：15596026 （100ML）和15596018（200ML）

產(chan) 品優(you) 點：可快速簡單地獲得高純度總RNA

保存溫度：2-8度

效期：4度保存可2年

用途：TRIZOL試劑純化的RNA可用於(yu) PCR、RNA印跡分析、poly（A）+篩選或斑點雜交。純化的DNA和蛋白質分別適用於(yu) DNA和蛋白質印跡分析。

Invitrogen TRIZOL說明書(shu) ：

從(cong) 細胞中提取總RNA 
1） 培養(yang) 貼壁細胞：不須消化，可直接用Trizol進行消化、裂解，Trizol體(ti) 積按10cm2/ml比例加入。 
2） 懸浮細胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5×106動物、植物或酵母細胞，或107細菌細胞。
從(cong) 組織中提取總RNA 
1）液氮研磨，組織塊直接放入研體(ti) 中，加入少量液氮，迅速研磨，待組織變軟，再加少量液氮， 
再研磨，如此三次，按50-100mg組織/mlTrizol加入Trizol，轉移入離心管進行第2步操作。 
2） 勻漿：組織樣品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol，另外，組織體(ti) 積不能超過Trizol體(ti) 積 
的10%，否則勻漿效果會(hui) 不好，用電動勻漿器充分勻漿約需1-2分鍾。 
2．細胞或組織加Trizol後，室溫放置5min，使其充分裂解。注：此時可放入-70℃長期保持。 
3．12000rpm 離心5min，棄沉澱。 
4．按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振蕩混勻15分鍾，室溫放置15min。注：禁用漩渦振蕩器， 
以免基因組DNA斷裂。 
5．4℃12000g離心15min。 
6．吸取上層水相，至另一離心管中。 
注：1）千萬(wan) 不要吸取中間界麵。 
2）若同時提取DNA和蛋白質，則保留下層酚相存於(yu) 4℃冰箱,若隻提RNA，則棄下層酚相。 
7．按0.5ml異丙醇/ml Trizol 加入異丙醇混勻，室溫放置5-10min。 
8．4℃ 12000g離心10min，棄上清，RNA沉於(yu) 管底。 
9．按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇，溫和振蕩離心管，懸浮沉澱。 
10．4℃ 8000g離心5min，盡量棄上清。 
11．室溫晾幹或真空幹燥5-10min。 注：RNA樣品不要過於(yu) 幹燥，否則很難溶解。 
12．可用50ul H2O，TE buffer或0.5%SDS溶解RNA樣品，55-60℃5-10min。 
注：H2O、TE或0.5%SDS均須用DEPC處理並高壓。 
12、測O.D值定量DNA濃度。 
注：1）此方法提取RNA A260/A280值在1.6-1.8之間。 
2） 產(chan) 率估計：組織標本：（ug RNA組織）1-10ug，培養(yang) 細胞（ug RNA/106 Cell）：5-15ug。 
注：1、組織或細胞量過少，可酌情減少Trizol用量。 
2、組織或細胞用量過多，會(hui) 引起DNA對RNA的汙染。 
3、高蛋白，脂肪或多糖類組織，肌肉組織或塊狀植物組織等，組織勻漿或液氮研磨 
後須4℃ 1200離心10min去掉不溶物，再進行下麵操作，若頂層有脂肪物，則 
也須去掉。 
4、熱天提RNA，帶手套是必須的，手是RNase的主要來源。 
5、組織塊用液氮研磨，****，若沒有液氮或電動勻漿器，可用手動勻漿器代替， 
此時組織塊不宜過大，且需先用眼科剪將組織絞碎，然後再充分研磨。 

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