蛋白質樣品的微量分析簡述

測量蛋白質的紫外光吸收是微量蛋白質濃度和純度分析最直接的方法。芳香族氨基酸和許多蛋白質的殘基表現出很強的紫外線吸收，在 280nm 處達到峰值。吸收的光量與(yu) 樣品的濃度成正比。使用 Beer-Lambert 方程，可以將蛋白質量化為(wei) 這種吸收行為(wei) 的一個(ge) 因素。

直接 UV 吸光度測量是一種簡單有效的純化蛋白質方法，但它們(men) 並不是通用的定量方法。相反，分光光度法技術必須根據對分析物的理解以及樣品中是否存在可能幹擾 280nm 直接定量的緩衝(chong) 液或溶劑進行定製。

本文將探討用於(yu) 蛋白質微量分析和生物化學應用的四種替代蛋白質定量分析。

二辛可寧酸 （BCA）

BCA 或 Smith 測定法是一種比色測定法，專(zhuan) 為(wei) 分析溶液中的蛋白質樣品而設計。在分光光度法分析之前，蛋白質與(yu) 銅離子結合形成銅-二辛可寧酸 （Cu-BCA） 螯合物;一種紫色複合物，在色度強度和蛋白質濃度之間具有線性相關(guan) 性。這種複合物可吸收 562nm 的光，並與(yu) 去汙劑兼容。

Bradford 檢測

Bradford 分析是用於(yu) 微量分析的相對成熟的比色蛋白質定量工具之一。它基於(yu) 帶正電荷的蛋白質與(yu) 帶負電荷的考馬斯染料的結合。該複合物吸收 595nm 的光。然後可以將吸光度光譜與(yu) 標準曲線進行比較，以確定蛋白質濃度。

Lowry 微量分析

改良的 Lowry 分析是一種銅基試劑，可在 650nm 波長下測量銅-蛋白質複合物的吸光度。與(yu) Bradford 測定一樣，必須通過與(yu) 測定標準曲線進行比較來估計結果。

皮爾斯 660

Pierce 660 分析設計用於(yu) 對與(yu) 染料-金屬複合物結合的蛋白質進行微量分析。它與(yu) 包含去汙劑和還原劑的溶液兼容，在 660nm 的波長處表現出吸收。

使用 DeNovix 進行微量分析

DS-11 係列分光光度計可在整個(ge) 紫外-可見光譜範圍內(nei) 進行吸光度測量，使用 280nm 吸光度和市場上最常見的比色分析方法進行直接定量，能夠對蛋白質樣品進行微量分析。標準曲線功能增強了這一點，該功能繪製 2 – 8 條標準曲線，用於(yu) 吸光度值的快速比較分析。DS-11 特別適用於(yu) 定量低至 1 μL （μl） 樣品體(ti) 積的 BSA、IgG 和定製蛋白質，並全麵實施上述蛋白質檢測。