如何為成功檢測選擇合適的抗體

抗體(ti) 是生物化學、細胞生物學和免疫學實驗室的重要檢測工具。鑒於(yu) 用於(yu) 無數應用的抗體(ti) 和抗體(ti) 片段種類繁多，有時找到合適的抗體(ti) 和抗體(ti) 片段是一項艱巨的任務，更不用說可能危及抗體(ti) 依賴性實驗的廣泛問題。交叉反應性、批次間差異以及在未經測試的應用中使用抗體(ti) 等常見原因被認為(wei) 是導致結果不一致的原因。在這裏，我們(men) 分享了一些實驗室到實驗室的技巧，以選擇您研究目的的抗體(ti) 。

定義(yi) 您的蛋白質靶標 – 了解蛋白質靶標的生物學特性，因為(wei) 蛋白質靶標可能非常複雜，並且與(yu) 相關(guan) 蛋白質的序列同一性或同源性可能會(hui) 產(chan) 生潛在的交叉反應性。使用 GeneCards 等數據庫來識別抗原的命名法和任何替代名稱，並使用 UniProt 獲得目標蛋白質的氨基酸序列。

選擇正確的應用程序 – 選擇與(yu) 您的研究最匹配的應用程序。這取決(jue) 於(yu) 您需要回答研究問題的數據類型。例如，Western blot 是研究蛋白質濃度的應用;免疫組織化學和免疫細胞化學用於(yu) 研究定位，因為(wei) 它們(men) 與(yu) 固定的細胞和組織一起工作;而 ELISA、FACS 和流式細胞術是研究蛋白質相互作用和表達的合適技術。

確保抗體(ti) 適合您的樣品 – 由於(yu) 靶標的序列和結構因物種而異，因此請使用已針對您感興(xing) 趣的物種專(zhuan) 門驗證的抗體(ti) 。在這種情況下，請相信數據表：如果抗體(ti) 已針對一種物種進行了驗證，則無法保證它對其他物種有效。

選擇兼容的抗體(ti)  – 不應假設已證明可在一種應用中檢測靶標的抗體(ti) 在其他應用中也能檢測到靶標。免疫化學應用依賴於(yu) 使用敏感和高度特異性的抗體(ti) 。更具體(ti) 地說，它們(men) 取決(jue) 於(yu) 抗原識別靶蛋白的能力。為(wei) 了實現有效的抗原-抗體(ti) 相互作用，表位必須易於(yu) 結合。有時抗原可能需要靶蛋白以天然和折疊形式存在，或以變性形式存在。

通過固定、pH 值變化或在凝膠電泳製備過程中，表位可能會(hui) 發生變化，這可能會(hui) 影響其與(yu) 抗體(ti) 相互作用的能力。例如，在 IHC 研究中，抗體(ti) 可以識別冰凍組織切片中的表位，但該表位可能無法在已變性以進行 Western 印跡分析的樣品中獲得。

選擇宿主物種 – 通常，建議避免使用與(yu) 目標樣品物種相同的宿主抗體(ti) 物種，以避免幹擾免疫球蛋白。選擇宿主物種時，請考慮針對一抗的宿主物種產(chan) 生的二抗，並根據應用進行選擇。

研究產(chan) 品數據表並準備好優(you) 化您的方案 – 產(chan) 品數據表通常包含許多重要細節，包括免疫原的描述、表位的性質、宿主物種、交叉反應性和推薦的起始稀釋度。因此，在設置方案時需要考慮許多因素，例如封閉緩衝(chong) 液、抗體(ti) 稀釋劑、孵育步驟的長度和檢測方法。所有這些額外的細節將幫助您優(you) 化實驗方案以實現成功的分析。

始終包括實驗對照 – 在規劃實驗時，對照是有助於(yu) 了解結果是成功還是失敗的關(guan) 鍵部分。大多數常見的實驗技術需要特定的控製來幫助解釋數據。例如，Western 印跡應始終包含上樣對照，而 IHC 和 IF 應始終具有多個(ge) 陰性對照，以幫助區分信號與(yu) 背景噪音。

陽性對照的示例可能包括重組蛋白或由已知可產(chan) 生可檢測靶標水平的細胞係製備的裂解物;而陰性對照可能包括使用敲除樣品或省略一抗，這兩(liang) 者都可以檢測到二抗引起的背景染色。

總之，盡管找到適用於(yu) 特定應用的抗體(ti) 有時仍然是一項艱巨的任務，但我們(men) 希望這些提示和指南能為(wei) 您的搜索提供一些有用的起點。