熒光金抗體使用指南和方案

在PVN 中注射氟金後，左心室第三側(ce) 的下丘腦細胞(40倍)抗體(ti) 為(wei) 1/50.000.

抗體(ti) 的儲(chu) 存和製備

您將收到裝在小瓶中的抗熒光金抗體(ti) 。這是一種在兔子體(ti) 內(nei) 產(chan) 生的多克隆抗體(ti) 。小瓶中約有 100ml抗體(ti) 溶液。應立即冷凍並儲(chu) 存在寒冷(-20 攝氏度)、黑暗、幹燥的環境中。一台好的商用冰箱的冷凍室(沒有無霜功能)就足夠了。如果正確且持續地冷凍，抗體(ti) 溶液可以儲(chu) 存長達一年。

抗體(ti) 溶液應保持冷凍直至準備使用。100ml抗體(ti) 的稀釋度為(wei) 1/100。抗體(ti) 可在 BSA稀釋劑(50 mM KPBS、0.4% Triton、1%BSA、1%NGS)中進一步稀釋 1/50,000至 1/100,000倍，以產(chan) 生 50ml至 100ml 的工作滴度。這意味著您可以將收到的溶液稀釋 500 至 1,000 倍。如果您使用 Vector elite 試劑盒，這應該可以處理 300至 1000個(ge) 切片。製備後，抗體(ti) 溶液可在陰涼(4攝氏度)、黑暗幹燥的環境中保存長達七天。優(you) 質商用冰箱的冷藏室就足夠了。我們(men) 不建議在製備後七天後使用該溶液。請勿重新冷凍抗體(ti) 溶液。

抗體(ti) 的使用

熒光金可通過多種不同方法注射，包括壓力法、離子電滲法和各種研究人員開發的其他應用。參見 Schmued 和 Fallon 的《熒光金:一種具有多種*特特性的熒光逆行軸突示蹤劑》，《腦研究》，377(1986)147-154，以及 Pieribone 和 Aston-Jones 的《熒光金在研究深部腦核傳(chuan) 入神經中的離子電滲應用》，《腦研究》，475(1988)259-271。許多研究人員已經開發出自己的改良程序。抗體(ti) 的使用不應依賴於(yu) 使用熒光金的方法。

注射熒光金後，將漂浮切片(我們(men) 使用了灌注了 4%甲醛的大鼠的 30 微米切片)與(yu) 熒光金抗體(ti) 溶液在4攝氏度下孵育過夜。清洗切片，然後在室溫下以 1/1000 的比例在生物素化 GAR(Vector Labs)中孵育1小時，然後再次清洗。然後將切片以 1/1000 的比例在親(qin) 和素/生物素(Vector Labs)中孵育1小時，清洗並轉移到 01M酷酸鈉中的二氨基聯苯胺(0,04%)和化鎳(2.5%)中，加入 0.06%H202 六分鍾。然後清洗、安裝、幹、脫水並蓋上蓋片。

根據我們(men) 的經驗，如果按照上述方式儲(chu) 存和製備，如果您:使用 Vector elite 試劑盒，每瓶抗體(ti) 應該可以治療 300到 1000 個(ge) 30 微米的白化大鼠腦切片(或類似大小的動物)。但是，您應該嚐試不同的濃度和程序，以確定哪種*適合您的情況。

Ki-67 抗體(ti) -W 使用指南和方案

一般的:

Ki-67 抗體(ti) -W與(yu) Ki-67 蛋白發生反應。Ki-67蛋白是持續細胞增殖的內(nei) 在標記，存在於(yu) 細胞周期的所有活躍階段(G1、S、G2 和有絲(si) 分裂)，而不存在於(yu) 靜息細胞(GO)中。這意味著它是確定特定細胞群生長分數的極*標記。它廣泛用於(yu) 診斷、研究和藥物發現區用。Ki-67 抗體(ti) -W 是多克隆抗體(ti) ，在兔子體(ti) 內(nei) 培養(yang) 成人類肽序列-TPKEKAOALEDLAGEKELFOT-它在注射到兔子體(ti) 內(nei) 之前通過戍二醛與(yu) 甲狀腺球蛋白偶聯。我們(men) 的抗體(ti) 已用於(yu) 大鼠和人腦組織的免疫細胞化學。它將與(yu) 吸收特定肽的濾紙一起出售，用於(yu) 阻斷。這使研究人員能夠確認特定信號

Ki-67 抗體(ti) -W 的表征

A.7日齡大鼠海馬中的 Ki-67 陽性細胞(10X)B.共聚焦顯微鏡下拍攝的海馬中的 Ki-67細胞(60X)

C.海馬中的 Ki-67 阻斷 (10X)

通過阻斷研究確定特異性。將7日齡大鼠海馬的相鄰切片與(yu) Ki-67 抗體(ti) -W單獨孵育(A-10X)和(B-60X)或與(yu) Ki-67抗體(ti) -W與(yu) Ki-67 肽預孵育(C-10X)-起孵育。注意 A和 B 中的標記以及 C 中的無標記，表明抗體(ti) 結合的特異性。

儲(chu) 存和準備:

您收到的藥瓶中含有約 200ml 溶液，稀釋度為(wei) 1/100。Ki-67Antibody-W可在 BSA稀釋劑(50mM KPBS、0.4% Triton、1%BSA、1%NGS)中進一步稀釋至至少 1/20.000。

抗體(ti) 應儲(chu) 存在-20C下。還包括用特定肽吸附的濾紙以進行陽斷。可將 500ul稀釋抗體(ti) 加入管中以達到 10uM 陽斷。在應用於(yu) 組織之前，在室溫(RT)下孵育至少1小時。該抗體(ti) 特異性地阻斷此肽，而不會(hui) 阻斷濾紙上吸附的其他肽。

勢議:

將新鮮冷凍的 10-30 微米切片在室溫下用 4%多聚甲醛(EA)固定1小時，用磷酸鹽緩衝(chong) 鹽水 (PBS)清洗，然後在 90C下用 10% 檸學酸鈉處理 40 分鍾。將切片在檸標酸鈉溶液中冷卻 20 分鍾，用 PBS 清洗，並與(yu) PBS 中的 0.至 0.3% H202 一起孵育 10 至 30分鍾。再次用 PBS 清洗組織，然後用親(qin) 和素/生物素陽斷試劑盒(Vector-cat #SP-2001)處理，清洗後在室溫下用 BSA 稀釋劑孵育1小時。將 Ki67抗體(ti) (1/20,000)在室溫下過夜應用於(yu) 組織。用 PBS 清洗後，將切片在1/1000 生物素化的 GAR(Vector labscat#BA1000)中在室溫下孵育1小時，清洗後在 1/1000親(qin) 和素/生物素(Vector labs-cat#PK6100)中在室溫下孵育1小時。

Ki-67 抗體(ti) -W也適用於(yu) Fluorochrome,LLG銷售的 BRDU 抗體(ti) -W可視化方案。但是，可以使用 4% FA 灌注組織代替新鮮冷凍切片。

出版物:

Perez 等人，《神經科學雜誌》，2009年5月13日:29(19):6379-6887Garcia-Fuster等人，正在準備中:實驗者注射可*因後成人海馬神經發生的個(ge) 體(ti) 差異。

GEAP 抗體(ti) -W 使用指南和方案

概述:

GFAP 抗體(ti) -W 與(yu) 膠質纖維酸性蛋白(GFAP)發生反應，GFAP是 I 類中間絲(si) ，是星形膠質細胞中中間絲(si) 的主要成分，可作為(wei) 成熟膠質細胞的細胞特異性標記。它可用作神經幹細胞和星形膠質細胞的標記，包括許多類型的源自表達 GEAP 的星形膠質細胞的腦腫瘤。GEAP 抗體(ti) -W是多克峰抗體(ti) ，在兔子體(ti) 內(nei) 培養(yang) 成肽序列 NAGEKETRASERAE(人、大鼠和小鼠)，通過成二醛與(yu) 甲狀腺球蛋白偶聯，然後注射到兔子體(ti) 內(nei) 。我們(men) 的抗體(ti) 已用於(yu) 大鼠和人腦組織的免疫細胞化學。它還將與(yu) 吸收特定肽的濾紙一起出售，用於(yu) 陽斷。這使研究人員能夠確認特定信號。

GFAP 抗體(ti) -W 的表征

A.成年大鼠海馬中的 GFAP 膠質細胞 (10X)

B.共聚焦顯微鏡下拍攝的海馬中的 GFAP 膠質細胞(60X)

C.海馬中的 GEAP 陽斷 (10)

通過陽斷研究確定特異性。將成年大鼠海馬的相鄰切片單獨與(yu) GEAP 抗體(ti) -W(A-10X)和(B-60X)一起孵育，或與(yu) GEAP抗體(ti) -W與(yu) GFAP 肽預孵育(C-10X)一起孵育。注意膠質細胞中的A和 B標記以及 C 中無標記，表明抗體(ti) 結合的特異性。

儲(chu) 存和準備:

您收到的試劑瓶中含有約 200ul稀釋度為(wei) 1/100 的抗體(ti) 。抗體(ti) 可在 BSA稀釋劑(50mM KPBS、0.4% Triton、1% BSA、1%NGS)中進一步稀釋至至少 1/30,000。

抗體(ti) 應儲(chu) 存在 -20C下。還包括用特定肽吸附的濾紙以進行陽斷。可將 500ml 稀釋抗體(ti) 加入試管中以達到 10 uM 阻斷。在應用於(yu) 組織之前，在室溫(RT)下孵育至少1小時。該抗體(ti) 可特異性地阻斷此肽，而不會(hui) 阻斷濾紙上吸附的其他肽。

協議:

將新鮮冷凍的 10-80 微米切片在室溫下用 4%多聚甲醛(FA)固定1小時，在磷酸鹽緩衝(chong) 鹽水 (PBS)中清洗，並與(yu) PBS 中的 0.1至0.3% H202 一起孵育 10 至 30分鍾。再次在 PBS 中清洗組織，然後用親(qin) 和素/生物素陽斷試劑盒(Vector-cat #SP-2001)處理，清洗後在室溫下用 BSA稀釋劑孵育1小時。將 GEAP 抗體(ti) -W(1/30,000)在室溫下應用於(yu) 組織過夜。在 PBS 中清洗後，將切片在室溫下在 1/1000 的生物素化 GAR (Vector labs-cat#BA1000)中孵育1小時，清洗後在室溫下在 1/1000 的親(qin) 和素/生物素(Vector labs-cat#PK6100)中孵育1小時。清洗後，用 0.1M乙酸鈉中的二氨基聯苯胺(0.04%)與(yu) 0.06% H202 混合溶液浸泡六分鍾以觀察信號(也可添加 2.5%的氯化鎳)。

GFAP抗體(ti) -W也適用於(yu) Fluorochrome,LLG 銷售的 BRDU抗體(ti) -W可視化方案。但是，可以使用 4% FA 灌注組織代替新鮮冷凍切片。

BrdU 抗體(ti) -W 使用指南和方案

概述:

該抗體(ti) 與(yu) 合成的胸苷類似物 BrdU 發生反應，當 BrdU 注射到動物體(ti) 內(nei) 時，它會(hui) 在細胞周期的S期被整合到活躍增殖細胞的新合成DNA 鏈中。可以通過免疫細胞化學測量存活的細胞數量。作為(wei) 評估一組細胞增殖狀態的出色工具，它已成為(wei) 藥物發現研究的關(guan) 鍵，尤其是在癌症治療和 ADME/TOx 研究期間確定細胞健康狀況方麵。BrdU 抗體(ti) -W 是在兔體(ti) 內(nei) 產(chan) 生的多克隆抗體(ti) ，可抵抗與(yu) 牛血清白蛋白(BSA)結合的 BrdU。我們(men) 的抗體(ti) 已用於(yu) 大鼠腦組織的免疫細胞化學。它將與(yu) 吸收了 BrdU 的濾紙一起出售，用於(yu) 阻斷。這使研究人員能夠確認特定信號。

BrdU 抗體(ti) -W 的表征

A.成年大鼠齒狀回中的 BrdU 陽性細胞(60X)，之前已注射 BrdU。共聚焦顯微鏡拍攝的照片B.齒狀回中的 BrdU 阻斷

通過進行陽斷研究確定特異性。將之前注射過 BrdU 的成年大鼠海馬的相鄰切片單獨與(yu) BrdU 抗體(ti) -W(A-60X)孵育，或與(yu) 與(yu) BrdU 預孵育的 BrdU 抗體(ti) -W(B-60X)孵育。注意A中的標記和 B中的無標記，表明抗體(ti) 阻斷的特異性。

儲(chu) 存和準備:

您收到的試劑瓶中含有約 200ml的稀釋度為(wei) 1/100 的試劑。BrdU Antibody-W可在 BSA稀釋劑(50mM KPBS、0.4%Triton、1% BSA、1% NGS)中進一步稀釋至至少 1/80,000。

抗體(ti) 應儲(chu) 存在 -20C下。還包括用 BrdU 吸附的用於(yu) 封閉的濾紙。可將 500m1稀釋抗體(ti) 加入試管中，以達到 10 μM 封閉。在應用於(yu)

組織之前，在室溫(RT)下孵育至少1小時。該抗體(ti) 特異性地封閉 BrdU，而不會(hui) 封閉濾紙上吸附的其他肽。

勢議:

將新鮮冷凍的 10-80 微米切片在 4%多聚甲醛(EA)中在室溫下固定1小時，在磷酸鹽緩衝(chong) 鹽水 (PBS)中清洗，然後在 65C下用50% 甲酰胺/2X SSC(300 mM 氫化鈉和 30 mM 檸檬酸鈉)處理 2小時。將切片在 2X SSC 中清洗，在 37C下在 2N HCL中孵育 80 分鍾，然後在室溫下直接放入 100mM 硼酸鈉(pH 8.5)中 10 分鍾。將切片在 PBS 中清洗，並與(yu) PBS 中的 0.1至 0.3%H202.孵育 10 至 80 分鍾。再次在 PBS 中清洗組織，然後用親(qin) 和素/生物素陽斷試劑盒(Vector-cat #SP-2001)處理，清洗並與(yu) BSA 稀釋劑在室溫下孵育1小時。將 BrdU 抗體(ti) -W(1/30,000)在室溫下過夜應用於(yu) 組織。在 PBS 中清洗後，將切片在室溫下在1/1000 的生物素化 GAR(Vector labs-cat#BA1000)中孵育1小時，

*注意:熒光金、熒光金抗體(ti) 、熒光紅寶石、KI-67 抗體(ti) -W、GEAP 抗體(ti) -W和 BrdU 抗體(ti) -W 僅(jin) 供實驗室研究動物或體(ti) 外試驗研究使用。不得用於(yu) 人體(ti) 。這些藥物應僅(jin) 供定期從(cong) 事神經解剖學研究和體(ti) 外試驗的人員或僅(jin) 用於(yu) 實驗室研究的動物使用。