細胞培養(yang) 的有效管理對於(yu) 保持其在研究和治療應用中的完整性至關(guan) 重要。細胞係的連續或長期培養(yang) 會(hui) 導致各種並發症,例如:
微生物汙染:
開放培養容易受到各種微生物感染,這些微生物會改變細胞行為和生存能力。特征變化:
關鍵的細胞特征,如抗原表達或抗體產生,可能會隨著時間的推移而丟失。遺傳(chuan) 變異:
基因組不穩定性可能發生在以核型不穩定而聞名的細胞係中,從而導致不可靠的實驗結果。壽命限製:
某些類型的細胞在進入衰老和停止增殖之前分裂次數有限。交叉汙染風險:
長期培養增加了一個細胞係汙染另一個細胞係的風險,從而導致錯誤的數據。資源密集度:
長期培養需要更多的消耗品和勞動力,大大增加了成本。
細胞庫的戰略方法
細胞庫係統是減輕上述風險的戰略方法。推薦的係統是主小區銀行係統,包括以下步驟:
初始隔離:
新獲得的細胞培養物應在嚴格的檢疫條件下隔離和處理,以防止實驗室汙染。Token Stock Establishment:
初始培養擴增後,應冷凍保存少量安瓿瓶(3-5瓶)作為應急備用的象征性儲備。主細胞庫形成:
從代幣儲備安瓿瓶擴大培養物,以建立由大量安瓿瓶組成的主細胞庫(10-20個或更多,根據計劃使用情況而定)。嚴(yan) 格的質量控製:
主細胞庫的一個子集經曆了全麵的質量控製測試,其中包括評估細胞活力,確認不存在微生物汙染物,並可能進行病毒和真實性測試。工作細胞庫的開發:
然後使用主細胞庫的一部分創建工作細胞庫,這是積極研究和應用的主要來源。
詳細的質量控製協議
質量控製是維護細胞庫的關(guan) 鍵部分。它包括:
生存力和計數測試:
確保細胞存活且數量充足。微生物篩選:
定期檢測細菌、真菌和支原體以防止細胞培養受損。認證程序:
通過DNA分析等方法確認細胞係的身份。
存儲和使用建議
正確的儲(chu) 存條件如下:
專(zhuan) 用存儲(chu) 設施:
利用專門為儲存細胞庫設計的設施,如液氮罐或電冰櫃,以防止交叉汙染並確保長期生存能力。
一致性和質量保證:
一致的細胞材料:
細胞庫係統確保實驗中使用的所有材料都來自一致的來源。受控通道數:
通過使用在可控傳代次數範圍內的細胞,實驗可變性被最小化。適時文化實踐:
僅在必要時培養細胞有助於保持細胞係的原始特性,並降低與保持連續培養相關的成本。