AP-TAG 技術改變了細胞表麵受體(ti) 和配體(ti) 的檢測和克隆方式。本發明的本質是允許編碼受體(ti) 的任何分泌性多肽配體(ti) 或胞外結構域的cDNA序列符合讀碼框地融合至pAPtag克隆載體(ti) 中的人胎盤分泌性堿性磷酸酶(AP)。所得配體(ti) -AP 融合蛋白(稱為(wei) AP-body)在 293T 或 CHO 細胞中表達時,可以高水平分泌到培養(yang) 基中,因此可以通過 AP 活性測定或使用抗 AP 抗體(ti) 的蛋白質印跡分析輕鬆檢測到。因此,配體(ti) -AP或可溶性受體(ti) -AP融合蛋白可以像抗體(ti) 一樣充當親(qin) 和劑,從(cong) 而可以方便、安全和靈敏地檢測和克隆其相應的細胞表麵受體(ti) 或配體(ti) 。與(yu) 傳(chuan) 統的放射性125I標記方法不同,AP-TAG是安全的,不需要配體(ti) /可溶性受體(ti) 純化。
自發明以來,AP-TAG技術已克隆了許多重要的細胞表麵受體(ti) 和配體(ti) ,包括Leptin、Semaphorin III、Nogo-66、IL-24、Jelly Belly的受體(ti) 以及Kit、Mek4和Sek受體(ti) 酪氨酸激酶的配體(ti) 。
如果您正在使用通過 DD 或其他方法克隆的分泌蛋白或細胞表麵分子,AP-TAG 技術可以讓您進一步對這些基因進行功能表征。
AP-TAG Kit B
用於(yu) 受體(ti) /配體(ti) 相互作用的非放射性檢測。
這種單向量係統是第三代AP-TAG技術。分泌型配體(ti) 或可溶性受體(ti) 可以與(yu) 分泌型堿性磷酸酶(AP)在其N端或C端融合以產(chan) 生“AP體(ti) "。所得的 AP 融合蛋白可以作為(wei) 分泌蛋白表達,並直接用作高度敏感的親(qin) 和劑,就像抗體(ti) 一樣。表位標簽(6xHis 和 myc)可以輕鬆純化、檢測和相互作用測定 (IP) AP 融合蛋白。下麵列出了其他改進的功能。
AP-TAG Kit A
用於(yu) 受體(ti) /配體(ti) 相互作用的非放射性檢測。
這是使用 pAPtag-2 和 pAPtag-4 載體(ti) 的第二代 AP-TAG 技術。分泌型配體(ti) 或可溶性受體(ti) 可以與(yu) 分泌型堿性磷酸酶(AP)在其N端或C端融合以產(chan) 生“AP體(ti) "。所得的 AP 融合蛋白可以作為(wei) 分泌蛋白表達,並直接用作高度敏感的親(qin) 和劑,就像抗體(ti) 一樣。