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ozbiosesciences脂轉染技術是如何工作的?

更新時間:2024-01-05      點擊次數:633

脂轉染是一種基於(yu) 脂質的轉染該技術屬於(yu) 生化方法,還包括聚合物、DEAE葡聚糖和磷酸鈣。

脂轉染原理是將核酸與(yu) 陽離子脂質製劑結合起來。由此產(chan) 生的分子複合物(稱為(wei) 脂質複合物)隨後被細胞吸收。 

脂轉染的主要優(you) 點是效率高、能夠在多種細胞類型中轉染所有類型的核酸、易於(yu) 使用、重現性好和低毒性。此外,該方法適用於(yu) 所有轉染應用(瞬時轉染、穩定轉染、共轉染、反向轉染、順序轉染或多重轉染……)、高通量篩選測定,並且在一些體(ti) 內(nei) 模型中也顯示出良好的效率。

它是如何工作的?

用於(yu) 脂轉染的脂質試劑通常由合成的陽離子脂質組成,這些脂質通常與(yu) 輔助脂質(例如 DOPE(1,2-二油酰磷脂酰乙醇胺)或膽固醇)混合。這些脂質混合物在生理 pH 值下組裝在脂質體(ti) 或膠束中,總體(ti) 帶正電荷,並能夠通過靜電相互作用與(yu) 帶負電荷的核酸形成複合物(脂質複合物)。基於(yu) 脂質的轉染試劑與(yu) 核酸的結合導致核酸的緊密壓縮和保護,並且這些陽離子複合物主要通過內(nei) 吞作用內(nei) 化。

一旦進入細胞,就會(hui) 有兩(liang) 種導致核酸釋放到細胞質中的機製。一種依賴於(yu) 聚陽離子殘基的內(nei) 體(ti) 緩衝(chong) 能力(稱為(wei) “質子海綿效應")。另一種描述了細胞帶負電荷的脂質中和轉染試劑的陽離子殘基導致內(nei) 體(ti) 膜不穩定的能力。

最後,導致 DNA 核攝取(siRNA 不需要)以及隨後基因表達的細胞和分子事件仍然具有高度推測性。然而,細胞分裂對轉染效率的重要性支持這樣的假設:有絲(si) 分裂過程中核膜破壞促進 DNA 核攝取。盡管如此,原代細胞(非分裂)和體(ti) 內(nei) 的轉染也可以通過脂轉染來實現,這證明DNA可以進入發生基因表達的細胞核。


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