抗原修複技術技巧有哪些？

對於(yu) 特定抗體(ti) ，我應該使用哪種抗原修複方法

一些公司測試其抗體(ti) 的免疫組織化學應用，並將在數據表中包含建議的 抗原修複方法（注意：一些建議的方法不是最佳的）。如果以上都沒有給您明確的答案，則需要進行測試。

如何使用各種抗原修複方法對新抗體(ti) 進行測試

最初，您可能想要測試 HIER 中的兩(liang) 種方法，例如 檸檬酸鹽緩衝(chong) 液 (pH 6)和 Tris-EDTA (pH 9)，以及 PIER 中的一種或兩(liang) 種方法，例如 蛋白酶 K和/或 胰蛋白酶。這應該會(hui) 給您一個(ge) 很好的機會(hui) 獲得特定抗體(ti) 的最佳抗體(ti) 。

我用各種抗原修複方法測試了我的抗體(ti)  ，但仍然沒有結果

該抗體(ti) 可能不適合福爾馬林固定、石蠟包埋的組織（某些抗體(ti) 僅(jin) 適用於(yu) 冰凍切片），或者該抗體(ti) 有問題（過期或損壞），您可能需要改用其他抗體(ti) 。

在熱誘導表位修複 (HIER) 方法中，哪一種比較好

檸檬酸鹽緩衝(chong) 液（pH 6）法是常用的方法之一。一些研究表明 Tris-EDTA (pH 9)或 Tris-HCl (pH 10) 更佳。測試可能是了解哪種抗體(ti) 適合特定抗體(ti) 的最佳方法。

使用HIER進行預處理時需要考慮哪些關(guan) 鍵因素

(1) 修複液溫度應在95℃左右。

(2)孵育時間至少10分鍾，一般20分鍾左右。

(3) 修複液的pH值取決(jue) 於(yu) 您所使用的溶液。

在蛋白水解酶誘導表位修複 (PIER) 方法中，哪一種比較好

蛋白酶 K似乎是常用的一種。濃度、孵育時間和溫度可能是需要考慮的更重要的因素。同樣，測試是了解哪種抗體(ti) 適合特定抗體(ti) 的最佳方法。

使用PIER進行預處理時需要考慮哪些關(guan) 鍵因素

(1) 酶的濃度通常為(wei) 0.05-0.1%，具體(ti) 取決(jue) 於(yu) 組織和固定的類型。

(2)孵育時間可為(wei) 5-30分鍾，常用10-15分鍾。

(3)孵化溫度通常為(wei) 37 ℃。

冰凍切片是否需要進行抗原修複：新鮮冰凍切片的免疫染色不需要進行抗原修複。因為(wei) 抗原修複是破壞福爾馬林固定形成的交聯，將新鮮冰凍切片切片並用冰冷的丙酮固定5-10分鍾。