細胞複蘇時血清更換注意事項及步驟

血清更換注意事項及步驟

一、推薦在複蘇時步驟：

1.首先準備一隻15ml離心管，加入3倍以上體(ti) 積培養(yang) 基（含10%澳範血清，1%青鏈黴素的適配培養(yang) 基，具體(ti) 培養(yang) 基類型查詢ATCC）。

2.將需要複蘇的凍存管放於(yu) 37℃水浴鍋中（液麵沒過凍存液），並持續輕柔晃動凍存管，直至冰晶消失。

2.迅速轉移細胞至無菌操作台，酒精棉球擦拭幹淨凍存管表麵後開蓋。

3.輕柔地將細胞轉移至已經準備好的無菌離心管，800-1000g離心5min（不同離心機離心力不同，請選擇合適離心力），棄去上清，用上述培養(yang) 基重懸細胞，放入37℃，5%二氧化碳培養(yang) 箱培養(yang) 。並隔天更換培養(yang) 基。

二、對於(yu) 對數生長期的細胞，推薦按梯度更換血清：

         將上述培養(yang) 基與(yu) 之前所使用培養(yang) 基按1：1混勻後，采用換液法更換培養(yang) 基。持續培養(yang) 1代後更換為(wei) 隻含10%澳範血清的培養(yang) 基。（其餘(yu) 所需物質照常添加）

三、不推薦直接更換血清：

        可能導致細胞營養(yang) 不良，形態變皺縮/纖細，代謝和活性相關(guan) 表型改變。

血清儲(chu) 存及化凍

儲(chu) 存：在 -15°C到-20°C低溫冰箱血清的保存期限為(wei) 5年。

解凍：第一步：從(cong) -40°C--80°C超低溫冰箱取出後需在 -20°C冰箱平衡48小時。

           第二步：立放與(yu) 水平搖床並開啟搖床。若解凍血清的時候無法使用搖床則在室溫下融化，前半小時內(nei) 每隔5分鍾-10分鍾輕微晃動血清使其瓶底及瓶身周邊的纖粘蛋白融化。

4度冰箱解凍血清容易造成析出並丟(diu) 失貼壁因子、會(hui) 影響細胞的培養(yang) 。

解析：血清中含有冷不溶蛋白較多如血清中纖粘蛋白（fibronection）屬於(yu) 冷不溶蛋白，在4度解凍時，不會(hui) 溶解，是以沉澱狀態在血清中。

           冰箱存在自動化霜功能，冰箱在化霜過程中箱體(ti) 處於(yu) 加熱狀態、貼近箱體(ti) 底部及周邊儲(chu) 存的試劑容易被溶解反複凍融影響質量。實驗室使用化霜冰箱的時候存放試劑時需避免直接存放在錫箔紙上麵。