核酸檢測常用的5種熒光染料的特點

核酸熒光染料對細胞核進行染色，定量測定細胞的熒光強度，從(cong) 而可以測定細胞核中DNA和RNA的含量，分析細胞周期和細胞增殖情況。有多種熒光染料可以對細胞中的 DNA 或 RNA 進行染色。常用的DNA染料有碘化丙啶（PI）、DAPI、Hoechst 33342等，RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。

1.熒光染料PI（碘化丙啶）

熒光染料PI（碘化丙啶）是一種可以對DNA進行染色的核染色試劑。它常用於(yu) 細胞凋亡檢測。英文全稱是Propidium Iodide。它是一種溴化乙錠類似物，嵌入雙鏈 DNA 後會(hui) 發出紅色熒光。雖然 PI 不能穿過活細胞膜，但它可以穿過受損的細胞膜並對細胞核進行染色。 PI 通常與(yu) Calcein-AM 或 FDA 等熒光探針一起使用，以同時對活細胞和死細胞進行染色。 PI-DNA複合物的激發波長和發射波長分別為(wei) 535 nm和615 nm。

2. EB（溴化乙錠）

溴化乙錠是一種高度敏感的嵌入熒光染料，是一種強致癌誘變劑，但價(jia) 格便宜。它與(yu) DNA 的結合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強度的飽和溶液中，每 2.5 個(ge) 堿基插入大約 1 個(ge) 溴化乙錠分子。 EB 的這一特性使其成為(wei) 常用於(yu) 瓊脂糖凝膠電泳中核酸染色的核酸染料。溴化乙錠在紫外區的302nm和366nm處有吸收峰。在紫外光照射下，溴化乙錠可激發出橙紅色熒光（590nm）。與(yu) DNA 結合的溴化乙錠複合物發出的熒光比不結合 DNA 的染料強 20-30 倍，因此溴化乙錠可以檢測小至 10 ng 的 DNA 帶，並且非常靈敏。

3. 凝膠綠和凝膠紅

Biotium公司研發推出的EB替代染料，具有與(yu) EB相似的染色效果，且在紫外光照射下不易淬滅，因此可用於(yu) 膠水回收。但價(jia) 格較貴。

GelRed和GelGreen是兩(liang) 種優(you) 秀的熒光核酸凝膠染色試劑，兼具高靈敏度、低毒性和超穩定性。其水溶性染料已通過美國EPA安全認證，廢物可直接倒入下水道，不會(hui) 造成任何環境汙染。

其特點是：
1）靈敏度高：GelRed和GelGreen是市場上靈敏度最高的凝膠核酸染料之一；
2）穩定性佳：可微波爐加熱，可常溫保存；
3）更安全：艾姆斯測試結果表明該染料的致突變性遠小於(yu) 溴化乙錠（EB）；
4）適應性廣：適用於(yu) 預製膠和膠後電泳染色；
5）染色過程簡單：與(yu) EB一樣，無需擔心預製膠和電泳過程中染料降解；電泳後染色過程僅(jin) 需30分鍾，無需脫色或水洗；
6) 對DNA和RNA遷移影響小：對核酸遷移影響比SYBR Green I?小；
7）與(yu) 標準凝膠成像係統和可見光激發的凝膠觀察裝置兼容：使用312nm激發的UV凝膠成像係統時，GelRed可以替代EB； GelGreen 足以替代凝膠觀察裝置中的任一 SYB 染料。然而，這種染料會(hui) 使小 DNA 片段遷移得更慢（與(yu) EB 相比）。

4. 黃金觀 I/II

Goldview對於(yu) 大的DNA片段有很好的染色效果，但是對於(yu) 500bp以下的片段則不太好。另一個(ge) 致命的弱點是它的熒光團在紫外光下很容易猝滅，通常需要5-10分鍾。會(hui) 消失。 Goldview 也不適合膠水回收。 Goldview實際上是AO（吖啶橙，劇毒產(chan) 品），其熒光效果遠不如EB，靈敏度差，底色嚴(yan) 重，不適合回收，不穩定，在紫外光下誘導突變的能力較差高。

5. SYBR Green 和 SYBR Gold

穩定性差，毒性大。屬於(yu) 花青素核酸染料。花青素染料並非無毒，隻是低毒。電泳等級已修改。改性有以下三種： 1.添加鹵素或氰基。 2.插入環狀羥基。 3、添加穩定劑。 SYBR Green I 是一種高靈敏度 DNA 熒光染料，適用於(yu) 各種電泳分析，操作簡單：無需脫色或洗滌。至少可以檢測到20pg DNA，比EB染色高25-100倍。當SYBR Green I與(yu) 雙鏈DNA結合時，熒光信號將增強800-1000倍。 SYBR Green I 染色的凝膠樣品熒光信號強，背景信號低。 SYBR Green 和 SYBR Gold 的穩定性遠不如 EB。SYBR係列染料還可進入細胞對細胞核中的線粒體(ti) 和DNA進行染色，造成傷(shang) 害。 SYBR Green I已被證明在紫外線照射下具有很強的誘變能力，使DNA或其他物質發生突變。 （您也可能對。。。有興(xing) 趣熒光染料示例和應用）