這些常用的標注工具你用過嗎？

抗體(ti) 或蛋白質標記是指將目標物質（酶、熒光素、生物素）與(yu) 抗體(ti) 或其他蛋白質共價(jia) 連接，並與(yu) 生成測試物質發生特異性反應，形成多重複合物。借助熒光顯微鏡、射線測量儀(yi) 、酶標檢測儀(yi) 、電子顯微鏡、發光免疫分析儀(yi) 等精密儀(yi) 器，可通過顯微鏡直接觀察檢測結果或在細胞、亞(ya) 細胞、超微結構、分子水平上自動測定檢測結果。對抗原和抗體(ti) 反應進行定性和定位研究，或應用各種液相和固相免疫分析方法定性和定量測定體(ti) 液中的半抗原和抗原。現在，抗體(ti) 標記技術已廣泛應用於(yu) 醫學病理學、免疫組織化學、分子生物學、生物製藥等領域的分析研究和技術測定。常見的抗體(ti) 標記技術包括酶標記、生物素化標記和熒光素標記。

常用的抗體(ti) /蛋白質標記技術

1. 酶標記

通過合適的方法將酶與(yu) 抗體(ti) 或蛋白質共價(jia) 鍵合，製成酶標記抗體(ti) 。然後，通過酶對底物的特異催化作用，生成有色不相容產(chan) 物或具有一定電子密度的顆粒。這些有色產(chan) 物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察。也可以用分光光度計來測量。顏色反應表明酶的存在，證明相應的免疫反應已經發生。

蛋白質-蛋白質綴合通常使用雙功能接頭交聯劑進行。交聯劑（NHS酯）的一端與(yu) 氨基酸賴氨酸和N端的胺（-NH2）反應，另一端（馬來酰亞(ya) 胺胺）與(yu) 硫醇基（-SH）反應存在於(yu) 氨基酸中。然而，SMCC 修飾的蛋白質極其不穩定，並且通常會(hui) 發生自身反應。

2. 生物素標記

親(qin) 和素和生物素可以與(yu) 蛋白質（抗原、抗體(ti) 、酶）、熒光劑和其他分子結合，而不影響後者的生物活性。是一種理想的標記劑。一個(ge) 抗體(ti) 分子可與(yu) 數十個(ge) 生物素或親(qin) 和素分子偶聯，親(qin) 和素或生物素分子可與(yu) 酶或熒光素結合形成生物放大係統，顯著提高檢測的靈敏度。常用的有親(qin) 和素-生物素標記法、親(qin) 和素-生物素橋法、親(qin) 和素-生物素-過氧化物酶複合物法。

3. 熒光標記

染料與(yu) 蛋白質的結合需要染料與(yu) 蛋白質之間形成穩定的共價(jia) 鍵，並且這種共價(jia) 鍵在大多數情況下都不能斷裂。與(yu) 蛋白質固有的熒光相比，小型有機染料在選擇標記位點和增強熒光方麵具有更大的靈活性，已廣泛應用於(yu) 蛋白質標記。用適當的熒光染料標記後，蛋白質可以在各種生物過程中可視化，以便可以在生化測定中量化或定位在細胞研究中心。染料-蛋白質綴合物已成為(wei) 研究酶活性、蛋白質相互作用、構象變化以及調節和觀察特定生物過程的非常重要的工具。它們(men) 已廣泛應用於(yu) ELISA、蛋白質印跡、流式細胞術和細胞成像。