抗體和重組蛋白使用、保存方法

無論是保存還是運輸，請避免反複凍融。反複凍融，冰晶會(hui) 破壞抗體(ti) 和重組蛋白的空間結構，導致蛋白變性形成多聚體(ti) 和重組蛋白構象改變，從(cong) 而降低抗體(ti) 的結合能力，也加快了抗體(ti) 球蛋白和重組蛋白的降解速度。抗體(ti) 和重組蛋白保存得當與(yu) 否，直接決(jue) 定了抗體(ti) 和重組蛋白的活性使用效果，如果保存得當，抗體(ti) 和重組蛋白活性大部分都可以維持數年。

1. 收到抗體(ti) 和重組蛋白後的操作

收到抗體(ti) 和重組蛋白後（大部分抗體(ti) 和重組蛋白是溶液態），請務必在 4℃，12000rpm，離心 3 分鍾，再打開管蓋進行分裝、溶解和保存（如果抗體(ti) 和重組蛋白體(ti) 積小於(yu) 50µl，請延長離心時間至 5 分鍾，以保證全部抗體(ti) 和重組蛋白均離心下來，幹粉狀態的同樣適用）。抗體(ti) 和重組蛋白使用特製的儲(chu) 存管，隻有在 12000rpm 離心 3 分鍾，才能將附著在管壁或蓋內(nei) 的抗體(ti) 和重組蛋白全部離心下來（即使是在 10000rpm 離心也會(hui) 離心不全，導致出現抗體(ti) 和重組蛋白的量不足的現象）。請詳細閱讀說明書(shu) ，並按照推薦的保存條件正確保存和使用抗體(ti) 和重組蛋白。

2. 抗體(ti) 和重組蛋白的長期保存

對於(yu) 大部分抗體(ti) 和重組蛋白，比較合適的保存方式是：抗體(ti) 分裝後保存在 -20℃，重組蛋白分裝後保存在 -80℃。

（1）分裝可以大程度的降低反複凍融對抗體(ti) 和重組蛋白活性的損害，同時也降低了由於(yu) 多次從(cong) 同一管中吸取抗體(ti) 和重組蛋白造成的汙染可能性。

（2）分裝的量以一次實驗用完為(wei) 好，最少不能少於(yu) 10 µl 每份。因為(wei) 分裝體(ti) 積越小，抗體(ti) 和重組蛋白的濃度越可能會(hui) 受到蒸發以及管壁吸附的影響。

（3）複融後的分裝抗體(ti) 和重組蛋白如果一次用不完，將剩餘(yu) 母液保存在 4℃，避免再凍起來。

（4）抗體(ti) 和重組蛋白工作液應該當天配製當天用完，4℃ 保存盡量不要超過 1 天。

（5）絕對避免將抗體(ti) 和重組蛋白保存在自動除霜冰箱中，將抗體(ti) 和重組蛋白保存在冰箱裏層，避免溫度變化造成反複凍融。

3. 抗體(ti) 和重組蛋白的短期保存

大部分的抗體(ti) 和重組蛋白收到後 4℃ 短暫保存 1~2 周，對抗體(ti) 和重組蛋白活性沒有影響。如果抗體(ti) 和重組蛋白很快會(hui) 使用（1~2 周內(nei) ），推薦在 4℃ 保存，這是為(wei) 了避免反複凍融對抗體(ti) 和重組蛋白活性的損害。最關(guan) 鍵的一點是要根據說明書(shu) 推薦的方式來正確的保存抗體(ti) 和重組蛋白。

4. 抗體(ti) 和重組蛋白的運輸條件

一般的運輸過程需要 1~2 周的時間，所以是在低溫 4℃ 的條件下來完成的。4℃ 運輸最主要的目的是為(wei) 了避免反複凍融對抗體(ti) 和重組蛋白活性的損害（如果使用幹冰運輸，那麽(me) 收到時抗體(ti) 和重組蛋白是凍起來的，為(wei) 了分裝就需要解凍，這就多了一次凍融的過程），所以運輸過程中一般避免幹冰運輸。

5. 抗體(ti) 和重組蛋白的穩定性

（1）抗體(ti) 的穩定性是自然界長期進化的結果，抗體(ti) 是免疫係統中最重要的分子之一，其穩定性是自然進化篩選的結果，在眾(zhong) 多物種中，抗體(ti) 分子形成了保守而穩定的結構。

（2）抗體(ti) 的高Tm值，在室溫下，甚至短時間溫度達到 50~60℃，抗體(ti) 分子都能維持正確折疊，保持其應有的活性。

（3）抗體(ti) 和重組蛋白的純度。 采用先進的抗體(ti) 和重組蛋白純化技術，確保抗體(ti) 和重組蛋白產(chan) 品的高純度，保障其抗體(ti) 和重組蛋白產(chan) 品的穩定性。

（4）抗體(ti) 和重組蛋白的濃度。高濃度的抗體(ti) 和重組蛋白產(chan) 品可減少容器表麵吸附造成的物質損失，高濃度的抗體(ti) 和重組蛋白穩定性更好。大部分抗體(ti) 和重組蛋白濃度為(wei) 1mg/ml，抗體(ti) 和重組蛋白純度高，特異性好，效價(jia) 更高。

6. 重組蛋白的特性

重組蛋白分為(wei) 凍幹粉和溶液態兩(liang) 種保存形式，原核細胞表達的重組蛋白為(wei) 凍幹粉狀態，真核細胞表達的重組蛋白為(wei) 溶液態保存，這樣使得重組蛋白非常穩定，在 -80℃ 條件下可保存數年。凍幹粉在使用前需進行溶解，其中溶解的方法非常關(guan) 鍵，因為(wei) 溶解不好會(hui) 降低蛋白的效用。溶液態保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意，這些都是用戶在實際應用中經常遇到的問題。

（1）原核細胞表達的重組蛋白。 大腸杆菌表達的凍幹重組蛋白，已經從(cong) 包涵體(ti) 中提純，添加了蛋白保護劑，使用過濾後的無菌水作為(wei) 複溶劑即可，複溶凍幹蛋白 100µg，用 86µl 的超純水，輕輕搖晃使蛋白溶解，再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可全溶解，一定不能使用渦旋儀(yi) 進行快速振蕩或劇烈搖晃。

（2）真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質不僅(jin) 要轉錄和翻譯，還要進行翻譯後的加工，使得蛋白質的空間折疊方式維持正常，所以重組蛋白必須在真核細胞中進行，如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nei) 含子，對翻譯後的蛋白質進行加工，這樣表達的蛋白質具有生物活性。我們(men) 用溶液態來保存，保持了其良好的活性和穩定性。

（3）重組蛋白的保護劑。在凍幹和儲(chu) 存過程中常用的保護劑或穩定劑有糖類，多元醇，聚合物，表麵活性劑，某些蛋白和氨基酸等。我們(men) 通常加 8%（質量比體(ti) 積）的海藻糖和甘露醇作為(wei) 凍幹保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質二級結構改變以及凍幹過程中蛋白質的伸展和聚集，甘露醇也是一種普遍應用的凍幹保護劑和填充劑。