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我們(men) 知道化合物可以是酸性、堿性和中性的。查看 pKa 和官能團可以幫助我們(men) 進一步選擇正確的 SPE 吸附劑，並更好地了解它如何與(yu) 我們(men) 感興(xing) 趣的分析物配合使用。我們(men) 來看看複合多巴胺：
圖 1.多巴胺的結構。
當我們(men) 觀察結構時，我們(men) 可以看到通過苯環的共軛。這種結合將增加我們(men) 的疏水鍵合。現在讓我們(men) 看看官能團的 pKa。
圖 2.每次 Chemicalize 添加多巴胺 pKa。
在圖 2 中，我們(men) 可以看到酸性醇官能團的 pKa 為(wei) 9.80，胺堿性官能團的 pKa 為(wei) 9.13。記住一般化學的一些基礎知識，我們(men) 知道強酸和強堿在幾乎整個(ge) 可用的 pH 範圍內(nei) 都會(hui) 被電離。對於(yu) 弱酸和弱堿來說，情況正好相反。弱酸和弱堿的電離可以通過控製 pH 值來控製（有效地打開或關(guan) 閉）。那麽(me) 什麽(me) 是強與(yu) 弱呢？讓我們(men) 看一下EVOLUTE® Express 用戶指南中的吸附劑化學選擇指南。
圖 3。查看分析物功能列，我們(men) 可以看到每個(ge) 類別的 pKa 範圍，我們(men) 將使用它來幫助我們(men) 確定用於(yu) 分析的最佳吸附劑化學性質。
酸性官能團的 pKa 值低於(yu) 弱酸性分析物官能團的 9.80 和 13.02。所以我們(men) 知道這些不是我們(men) 可以利用的東(dong) 西。堿性官能團 pKa 為(wei) 9.13，這屬於(yu) 我們(men) 的“弱堿性"類別。這意味著它在中性或酸性 pH 環境中將保持正電荷。有關(guan) pH 調節的快速回顧，請參閱pH 調節樣品製備博客。由於(yu) 我們(men) 有一個(ge) 弱堿性官能團，我們(men) 將通過使用 EVOLUTE®CX 吸附劑來利用離子交換潛力。
圖 4. EVOLUTE Express CX 吸附劑，請注意改性聚苯乙烯二乙烯基苯聚合物，它使吸附劑具有水潤濕性。
CX 吸附劑具有非極性（疏水性）和強陽離子交換功能。有一個(ge) 帶負電的磺酸官能團，可保留帶正電的分析物。我們(men) 可以在圖 4 中看到疏水性和離子相互作用。酸性官能團的 pK a約為(wei) -7，這告訴我們(men) 它將在整個(ge) pH 範圍內(nei) 100% 電離。我們(men) 還可以看到結構的反相相互作用部分，該部分將允許疏水 相互作用。
圖 5. 在這裏，我們(men) 可以看到裝載過程中 CX 吸附劑和帶電多巴胺分子之間發生疏水相互作用的位置。我們(men) 還看到同時發生的離子相互作用，從(cong) 而產(chan) 生混合模式相互作用。
現在讓我們(men) 看看 CX 吸附劑中的每個(ge) 步驟是如何發生的，如《濫用藥物尿液檢測的現行方法》中所示。
在此示例中，我們(men) 使用人血清，並將使用EVOLUTE®EXPRESS CX 30 mg 96 孔板部件號：601-0030-PX01。
| 步 | 描述 | 發生了什麽？ |
| 樣品前處理 | 100 µL 4% H 3 PO 4 | 稀釋樣品將有助於(yu) 降低粘度，使其更容易流過 SPE 吸附劑。 記住 pH 規則，我們(men) 會(hui) 將樣品預處理至比 pK a低 2 個(ge) 單位，以確保分析物 100% 電離。 磷酸的添加將確保我們(men) 的堿性官能團的最大電離。 |
| 條件（可選） | 1毫升甲醇 | 由於具有水可濕性官能團和玻璃料，因此在使用 EVOLUTE Express 係列時這是可選的。 |
| 正壓 | 建議正壓。 1 分鍾，2 小節 | 正壓避免了井間流量的變化。 通常優(you) 選使用氮氣來防止氧化，並且氮氣的純度可以防止汙染。 |
| 平衡（可選） | 1 毫升 4% H 3 PO 4 | 由於(yu) 具有水可濕性官能團和玻璃料，因此在使用 EVOLUTE Express 係列時這是可選的。 |
| 正壓 | 建議正壓。 1 分鍾 2 小節 | 正壓避免了井間流量的變化。 通常優(you) 選使用氮氣來防止氧化，並且氮氣的純度可以防止汙染。 |
| 樣品加載 | 200 µL 預處理樣品 | 這在建議的負載能力範圍內。 |
| 正壓 | 建議正壓。 1 分鍾，0.5 巴 | 正壓避免了井間流量的變化。 通常優(you) 選使用氮氣來防止氧化，並且氮氣的純度可以防止汙染。 |
洗1 | 1000 µL 4% H 3 PO 4 | 保持基本官能團的最大電離。 去除極性幹擾，例如鹽和小蛋白質。 |
| 正壓 | 建議正壓。 1 分鍾，0.8 巴 | 正壓避免了井間流量的變化。 通常優(you) 選使用氮氣來防止氧化，並且氮氣的純度可以防止汙染。 |
| 洗2 | 1 mL 50:50 甲醇/水 | 消除疏水相互作用，同時釋放疏水化合物，例如磷脂和溶血磷脂。 |
| 正壓 | 建議正壓。 1 分鍾，0.8 巴 | 正壓避免了井間流量的變化。 通常優(you) 選使用氮氣來防止氧化，並且氮氣的純度可以防止汙染。 |
| 洗脫 | 2 x 750 µL 78:20:2 二氯甲烷/甲醇/和氫氧化銨 | 添加堿性緩衝(chong) 液將中和分析物，破壞離子相互作用，從(cong) 而從(cong) 吸附劑中釋放分析物。 有機溶劑將破壞與(yu) 分析物之間任何剩餘(yu) 的疏水相互作用。 |
| 正壓 | 建議正壓。 1 分鍾，0. 巴 | 正壓避免了井間流量的變化。 通常優(you) 選使用氮氣來防止氧化，並且氮氣的純度可以防止汙染。 |
| 幹燥 | 空氣流或氮氣流 | 通常優選使用氮氣來防止氧化，並且氮氣的純度可以防止汙染。 |
| 重構 | 90:10 0.1 甲酸水溶液/ 0.1% 甲酸甲醇溶液 | 適合質譜分析的溶劑。 |
CX 樣品製備的典型過程基於(yu) 目標分析物的反相/疏水相互作用和離子交換能力。在圖 4 中，我們(men) 提到了聚合物吸附劑的額外優(you) 勢。為(wei) 什麽(me) 這很重要？在傳(chuan) 統的矽膠基 SPE 中，您必須調節和平衡疏水性的吸附劑和篩板。對於(yu) 這種聚合物 SPE 產(chan) 品，吸附劑和篩板都是水可潤濕的，並且對於(yu) 水性樣品，吸附劑能夠與(yu) 樣品相互作用，而無需調節和平衡。這還有一個(ge) 好處是可以消除分析過程中孔幹燥的可變性。如果您使用 96 孔板並且 A1 孔可能在 H12 之前幾分鍾被溶劑化，這尤其有用；EVOLUTE Express 係列的水潤濕能力可最大限度地降低孔幹燥和應用結果中孔與(yu) 孔之間差異的風險。
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