谘詢熱線
17621170138
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用 途：用於(yu) 人血清、血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中人線粒體(ti) 轉錄因子 A(TFAM)測定。
工作原理
本試劑盒采用的是生物素雙抗體(ti) 夾心酶聯免疫吸附法 (ELISA) 測定樣品中 人線粒體(ti) 轉錄因子 A(TFAM)水平。向預先包被了人線粒體(ti) 轉錄因子 A(TFAM)單克 隆抗體(ti) 的酶標孔中加入人線粒體(ti) 轉錄因子 A(TFAM)，溫育；溫育後，加入生物素 標記的抗 TFAM 抗體(ti) 。再與(yu) 鏈黴親(qin) 和素-HRP 結合，形成免疫複合物，再經過溫育 和洗滌，去除未結合的酶，然後加入底物 A、B，產(chan) 生藍色，並在酸的作用下轉 化成最終的黃色。顏色的深淺與(yu) 樣品中人線粒體(ti) 轉錄因子 A(TFAM)的濃度呈正相 關(guan) 。
試劑盒組成
試劑盒組成 | 48 孔配置 | 96 孔配置 | 保存 |
說明書(shu) | 1 份 | 1 份 | |
封板膜 | 2 片 (48) | 2 片 (96) | |
密封袋 | 1 個(ge) | 1 個(ge) | |
酶標包被板 | 1 ×48 | 1 ×96 | 2-8℃保存 |
標準品 640pg/ml | 0.5ml×1 瓶 | 0.5ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
標準品稀釋液 | 3ml×1 瓶 | 6ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
鏈黴親(qin) 和素-HRP | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
生物素標記的抗 TFAM 抗體(ti) | 0.5ml×1 瓶 | 1 ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑 A 液 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑 B 液 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3ml×1 瓶 | 6ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
濃縮洗滌液 | (20ml × 20 倍) × 1 瓶 | (20ml×30 倍) × 1 瓶 | 2-8℃保存 |
需要而未提供的試劑和器材
1． 37℃恒溫箱。
2． 標準規格酶標儀(yi) 。
3． 精密移液器及一次性吸頭
4． 蒸餾水，
5． 一次性試管
6． 吸水紙
注意事項
1． 從(cong) 2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少 30 分鍾。酶標包 被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差
3． 嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.
4． 為(wei) 避免交叉汙染，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜。
5． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
6． 底物 B 對光敏感，避免長時間暴露於(yu) 光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標板內(nei) 的液體(ti) ；在實驗台上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下 用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少 0.35ml注入孔內(nei) ，浸泡 1-2 分鍾。根據需 要，重複此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中
標本要求
1．不能檢測含NaN3 的樣品，因 NaN3 抑製辣根過氧化物酶的 (HRP) 活性。
2．標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實 驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融。
操作程序
1. 標準品的稀釋： (本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小
試管中進行稀釋。)
320pg/ml | 5 號標準品 | 120 μ l 的原倍標準品加入 120 μ l 標準品稀釋液 |
160pg/ml | 4 號標準品 | 120 μ l 的 5 號標準品加入 120 μ l 標準品稀釋液 |
80pg/ml | 3 號標準品 | 120 μ l 的 4 號標準品加入 120 μ l 標準品稀釋液 |
40pg/ml | 2 號標準品 | 120 μ l 的 3 號標準品加入 120 μ l 標準品稀釋液 |
20pg/ml | 1 號標準品 | 120 μ l 的 2 號標準品加入 120 μ l 標準品稀釋液 |
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決(jue) 定所需的板條數。每個(ge) 標準品和空白 孔建議做複孔。每個(ge) 樣品根據自己的數量來定，能使用複孔的盡量做複孔。
3. 加樣：1) 空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗 TFAM 抗體(ti) ，鏈黴 親(qin) 和素-HRP，隻加顯色劑 A&B 和終止液，其餘(yu) 各步操作相同；2) 標準品孔： 加入標準品 50ul，鏈黴親(qin) 和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體(ti) ， 故不加)；3) 代測樣品孔：加入樣本 40ul，然後各加入抗 TFAM 抗體(ti) 10ul、 鏈黴親(qin) 和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育 60 分鍾。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒後 棄去，如此重複 5 次，拍幹。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑 B50 μ l，輕輕震蕩混勻，37℃ 避光顯色 15 分鍾.
7. 終止：每孔加終止液 50 μ l，終止反應 (此時藍色立轉黃色) 。
8. 測定： 以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度 (OD 值) 。 測定 應在加終止液後 10 分鍾以內(nei) 進行。
9. 根據標準品的濃度及對應的OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據 樣品的OD 值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟 件來計算。
操作程序總結：
1.準備試劑，樣品和標準品
2.加入準備好的樣品和標準品，生物素標記的二抗和酶標試劑，37℃反應60分鍾
3.洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鍾
4.加入終止液
5.10分鍾內(nei) 讀OD值
6.計算
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與(yu) 預期濃度相關(guan) 係數 R 值為(wei) 0.92 以上。
2.批內(nei) 與(yu) 批間應分別小於(yu) 9%和 15%
檢測範圍：
檢測範圍： 10pg/ml-320pg/ml
保存條件及有效期：
保存：2-8℃。
有效期：6 個(ge) 月(2-8℃)。
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