轉染方法和技術

轉染是一種常見的實驗室細胞培養(yang) 技術，用於(yu) 許多研究領域、藥物發現和開發。 體(ti) 外轉染是指將貨物分子（例如核酸 – DNA或RNA）輸送到培養(yang) 的細胞（通常是癌細胞係）中。 體(ti) 內(nei)  轉染是指將貨物分子（如治療性 siRNA、質粒 DNA、小蛋白等）遞送至靶組織。有針對 體(ti) 外 和 體(ti) 內(nei)  轉染優(you) 化的市售轉染產(chan) 品，以及生物 CRO 提供的轉染服務經過 GLP 認證，可以根據 FDA 的要求進行這些臨(lin) 床前實驗。

轉染方法包括通過非病毒技術進行的各種方法（物理和化學方法）——電穿孔、磷酸鈣暴露、基於(yu) 脂質體(ti) 的轉染，允許通過細胞膜遞送貨物分子而不會(hui) 對細胞造成長久的損傷(shang) 。下麵描述了幾種化學轉染方法。

化學轉染方法

由於(yu) 可供購買(mai) 的轉染試劑簡單、成本高且種類繁多，化學轉染是一種流行的技術。瞬時轉染通常用於(yu) 持續數天的所需基因的短期表達。研究應用包括基因表達研究、基因沉默研究和重組蛋白分析。

化學轉染實驗的工作流程在各種細胞類型中都很常見。這包括在亞(ya) 匯合處接種細胞，在轉染前立即製備轉染試劑/DNA 複合物，然後評估構建體(ti) 的表達。細胞培養(yang) 基在接種細胞後一天更新，然後在轉染後幾小時更新。必須對轉染方案進行優(you) 化，以確保高轉染效率，並且該方法對被轉染的細胞無毒。

脂質體(ti) 轉染是使用脂質體(ti) 的轉染，脂質體(ti) 是可以與(yu) 細胞膜融合並能夠釋放其內(nei) 容物的小分子。脂質體(ti) 可以是基於(yu) 脂質的（更常見），也可以是基於(yu) 非脂質的。帶正電荷的陽離子聚合物與(yu) 帶負電荷的核酸結合良好，是另一種轉染方法。脂質體(ti) 轉染方法在新藥發現和開發中有多種常見應用，尤其是在腫瘤學中，其中的應用包括通過基於(yu) 小分子的藥物靶向特定基因（例如致癌基因）或使用 RNAi 技術進行基因沉默。

物理轉染方法

電穿孔和細胞注射（例如基因槍）是物理轉染方法的兩(liang) 個(ge) 經典例子，它們(men) 能夠完成核酸的遞送，但由於(yu) 細胞膜的破壞而對細胞很苛刻並且經常導致細胞死亡。對於(yu) 傳(chuan) 統上難以轉染的細胞來說，這是一個(ge) 合適的選擇。物理轉染涉及電穿孔、顯微注射和基因槍粒子遞送。

電穿孔取決(jue) 於(yu) DNA 濃度和所用細胞的類型。傳(chuan) 統的電穿孔需要使用電穿孔比色皿。許多公司銷售的電穿孔係統與(yu) 從(cong) 原代細胞和幹細胞到原核細胞和哺乳動物細胞的細胞類型兼容。

顯微注射通常用於(yu) 將 DNA 和 RNA 引入單個(ge) 細胞，例如胚胎幹細胞。借助顯微操作器和顯微鏡，DNA 或 RNA 直接插入細胞質或細胞核。這通常很耗時，但會(hui) 產(chan) 生非常高的轉染效率。

基因槍顆粒遞送依賴於(yu) 攜帶核酸的微粒將 DNA 或 RNA 引入細胞。一種快速的方法，將這些顆粒射入細胞，但缺點是細胞死亡率很高。

轉染方案和實驗細節

雖然轉染是一種非常廣泛和有用的技術，但它對被轉染的細胞類型具有高度特異性。一些細胞更適合轉染，而另一些細胞則不適合，因此一些細胞對某些轉染試劑更敏感。細胞係的廣泛多樣性和與(yu) 每個(ge) 細胞係相關(guan) 的具體(ti) 細微差別需要一本教科書(shu) 來充分描述，但值得慶幸的是，轉染試劑可以幫助實驗發揮作用，而無需進行廣泛的背景研究。許多公司開發了專(zhuan) 門針對特定細胞類型優(you) 化的轉染試劑，從(cong) 而確保基因編輯實驗的最大效率。

在設計轉染實驗時，了解轉染的最終目標尤為(wei) 重要；穩定表達需要與(yu) 瞬時轉染不同的設置，因此，應調整實驗方案。如果時間緊迫，那麽(me) 轉染實驗可以外包給可靠的公司，這些公司可以保證為(wei) 研究應用開發穩定或瞬時細胞係。

Altogen Biosesystems 的體(ti) 內(nei) 轉染試劑 

RNAi 已用於(yu) 使用動物模型的體(ti) 內(nei) 目標驗證研究。在體(ti) 內(nei) 進行 RNAi 研究的主要挑戰是將功能性小 RNA 分子有效、定向地遞送到特定組織中。 Altogen® In Vivo Transfection Reagents 可以與(yu) siRNA（或 microRNA）結合，並通過瘤內(nei) (it) 或通過靜脈 (iv) 尾靜脈注射進行全身給藥，以在特定組織（包括肝髒、胰腺、腎髒和腫瘤。早在注射後 24 小時就可以看到選擇性擊倒。

Altogen Biosesystems 的特色體(ti) 內(nei) 轉染產(chan) 品：  

體(ti) 內(nei) 納米顆粒轉染試劑盒 || 體(ti) 內(nei) 脂質轉染試劑盒 || 體(ti) 內(nei) 胰腺靶向轉染試劑盒     

Altogen Custom Services 提供專(zhuan) 業(ye) 的生物技術和製藥服務，包括60 多種經過驗證的異種移植模型、穩定細胞係的開發、RNA 幹擾 (RNAi) 服務、分析開發、ELISA 和蛋白質印跡服務、siRNA 文庫篩選和轉染服務。穩定表達細胞係的生成可能非常昂貴且耗時。Altogen Labs 提供僅(jin) 需 28 天即可完成的穩定細胞係生成服務。  

轉染方法和細胞轉染技術

細胞轉染是一種實驗室技術，用於(yu) 將核酸（例如 DNA、RNA 或 siRNA）輸送到細胞中以修飾其基因表達或研究基因功能。該技術涉及使用轉染試劑將核酸引入細胞，這有助於(yu) 它們(men) 進入細胞。

細胞轉染通常包括以下步驟：

1. 轉染試劑的選擇：研究人員選擇與(yu) 被轉染的細胞類型和被遞送的核酸類型兼容的轉染試劑。

2. 核酸的製備：通過從(cong) 天然來源分離它們(men) 或在實驗室中合成它們(men) 來製備核酸。

3. 轉染複合物的形成：核酸與(yu) 轉染試劑混合形成可進入細胞的複合物。

4. 細胞轉染：將轉染複合物加入細胞中，孵育細胞，使核酸進入細胞。

5. 轉染效率分析：通過使用 PCR、蛋白質印跡或熒光顯微鏡等技術測量遞送核酸的基因表達水平來評估轉染效率。

細胞轉染是研究基因功能和開發遺傳(chuan) 疾病或癌症新療法的寶貴工具。然而，轉染的效率和特異性會(hui) 受到多種因素的影響，包括轉染試劑的選擇、被轉染的細胞類型和實驗條件。因此，仔細優(you) 化轉染條件和適當的控製對於(yu) 確保轉染實驗的可靠性和可重複性非常重要。