小鼠黑色素瘤細胞

小鼠黑色素瘤細胞係（B16BL6）是一株小鼠黑色素瘤細胞係。據報道，它可在體(ti) 外常規傳(chuan) 代培養(yang) ，產(chan) 生高濃度的黑色素。

【細胞名稱】小鼠黑色素瘤細胞

【細胞別名】B-16; B16 melanoma; B16 subline B78; B78

【種屬來源】小鼠

【組織來源】皮膚

【細胞形態】成纖維細胞樣

【生長特性】貼壁生長

【培養(yang) 體(ti) 係】RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

【傳(chuan) 代比例】1:3-1:6，每 2-3 天換液一次

【培養(yang) 條件】氣相：95%空氣+5%二氧化碳，溫度：37℃

【凍存條件】凍存液：55%基礎培養(yang) 基+40%FBS+5%DMSO；存儲(chu) 條件：液氮

【安全性】建議在二級生物安全台內(nei) 操作，並做好個(ge) 人防護。

【用途】僅(jin) 供科研使用

二、複蘇及傳(chuan) 代方法

1、細胞株的複蘇（凍存管）

（1）將凍存管在37℃水浴鍋中迅速全融化，並適當輕輕搖晃促融。快速、全融化可以提高細胞的複蘇效果。

（2）打開凍存管前時用75%酒精擦拭細胞凍存管外壁。

（3）將全融化的細胞直接離心，或者轉移至無菌15ml或其它合適無菌離心管中，400g離心5min，吸除上清，注意不要吸走細胞沉澱，然後用新鮮*全培養(yang) 液重懸後轉移至培養(yang) 器皿，混勻，置於(yu) CO2培養(yang) 箱37℃培養(yang) 。

（4）第二天視貼壁或生長狀態，更換培養(yang) 液。

注意：如果收到的凍存管不能及時進行複蘇，還請置於(yu) -80℃或液氮中進行暫存，並盡快複蘇進行培養(yang) 。

2、細胞株的複蘇（T25瓶）

（1）將收到T25瓶脫外包後用75%酒精擦拭瓶外壁。

（2）置於(yu) 倒置顯微鏡下觀察細胞狀態，看是否有異常；無異常後，采用移液器移去多餘(yu) 的培養(yang) 液，置於(yu) CO2培養(yang) 箱37℃培養(yang) 過夜。

（3）第二天視貼壁或生長狀態，考慮進行換液或傳(chuan) 代，傳(chuan) 代比例參考1:2~1:4。

三、注意事項

1、每支凍存管約含1×106個(ge) 細胞，體(ti) 積為(wei) 1ml，預期存活率60-90%，建議複蘇至1個(ge) T25瓶或1個(ge) 6cm培養(yang) 皿中。如果複蘇後存活率較低，可以消化後轉移至3.5cm培養(yang) 皿/T12.5瓶中，這樣細胞生長會(hui) 更好。

2、如果本產(chan) 品是常溫運輸，並且是培養(yang) 瓶中充滿*全培養(yang) 液的貼壁細胞，收到細胞後：

（1）及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現象。

（2）用75%酒精擦拭細胞培養(yang) 瓶表麵，顯微鏡下觀察細胞狀態。先不要打開培養(yang) 瓶蓋，將細胞置於(yu) 細胞培養(yang) 箱內(nei) 靜置培養(yang) 2~4小時，以便穩定細胞狀態。

（3）仔細閱讀細胞說明書(shu) ，了解細胞相關(guan) 信息。

（4）靜置完成後，取出細胞培養(yang) 瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態。

3、如果細胞密度超過85%請盡快進行傳(chuan) 代操作；如果懸浮的細胞較多，請將培養(yang) 瓶置於(yu) 培養(yang) 箱中靜置過夜以使懸浮的細胞再次貼壁。如果收到的是常溫運輸的離心管裝的懸浮細胞，可以直接取出轉移至培養(yang) 皿或培養(yang) 瓶中培養(yang) 。若培養(yang) 液顏色正常則保留培養(yang) 液繼續培養(yang) ，並且在*次更換培養(yang) 液時，保留一半原培養(yang) 液，並加入一半新鮮培養(yang) 液，這樣可以盡量避免由於(yu) 培養(yang) 液或血清差異導致細胞生長的不適應，確保細胞良好的生長狀態。

4、細胞培養(yang) 請在生物安全櫃台中進行操作，並嚴(yan) 格遵守無菌操作。

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