Lipods293™ In Vitro DNA Transfection Reagent

Lipods293™ In Vitro DNA Transfection Reagent  產(chan) 品型號：SL100668

通過利用我們(men) 創新的特色脂質結合技術，Lipods293(Ver. II)是通過添加用於(yu) 轉染HEK293細胞和其他哺乳動物細胞的有增強子而專(zhuan) 門設計和配製的(圖1)。作為(wei) 第二代基於(yu) 脂質體(ti) 的DNA轉染試劑，lipods 293(Ver II)為(wei) HEK293相關(guan) 細胞以及許多細胞毒性較低的哺乳動物細胞提供高效率。Lipods293試劑(Ver. II)從(cong) 其先前版本升級而來，具有精細的化學性質，在基因遞送方麵的效率提高了3~4倍。Lipods293試劑(Ver. II)，1.0 ml，足以在24孔板中進行約666次轉染或在6孔板中進行約333次轉染。


圖一。一幅展示Lipods293(版本。II)增強的基因遞送

特征
-難以轉染細胞的選擇
-病毒產(chan) 量高
-同樣適用於(yu) 很長的DNA(高達180 kb)
-同樣適用於(yu) 懸浮293細胞(如293F、293H等)
-高水平的重組蛋白生產(chan)
-血清和抗生素的存在提高了293細胞的效率
-單DNA轉染和多DNA共轉染的高效率
-非常實惠

儲(chu) 存條件
儲(chu) 存在4°c。如果儲(chu) 存得當，該產(chan) 品可穩定儲(chu) 存12個(ge) 月或更長時間。

lipods 293 DNA體(ti) 外轉染試劑(Ver。II)品牌產(chan) 品

Lipods293試劑轉染效率的比較(版本II)對HepG2細胞的lipofectamine 2000 (L2K)和Fugene HD。
右圖:Lipods293轉染效率的比較(版本。II)用Lipofecatmine 2000 (L2K)和Fugene HD對HepG2細胞進行處理。GFP DNA (pEGFP-N3)按照生產(chan) 商的方案用不同的轉染試劑轉染HepG2細胞(在膠原蛋白預處理的培養(yang) 皿上培養(yang) )。轉染後48小時通過流式細胞儀(yi) 檢測GFP陽性細胞(%)和熒光強度
左圖:血清和抗生素的存在增強了Lipods293(版本。II)對HepG2細胞的效率。用三種不同的條件轉染HepG2細胞(在膠原蛋白處理的培養(yang) 皿上生長)——不含血清和抗生素，存在10%血清和抗生素，轉染後5小時去除，存在10%血清和抗生素，轉染後5小時不去除。


Lipods293試劑轉染效率的比較(版本II)對CHO細胞的lipofectamine 2000 (L2K)、TransIT和Fugene 6。
右側(ce) 麵板:比較Lipods293的轉染效率(Ver。II)用Lipofecatmine 2000 (L2K)、TransIT和Fugene 6對CHO細胞進行處理。編碼海腎螢光素酶(phRL-CMV)和GFP (pEGFP-N3)的DNA用不同的DNA轉染試劑按照製造商的方案轉染。轉染後24小時，分別用海腎檢測係統和Nikon Eclipse熒光顯微鏡檢測海腎熒光素酶活性和GFP熒光。
左側(ce) 麵板:Lipods293與(yu) Lipofecatmine 2000 (L2K)、TransIT和Fugene 6的價(jia) 格(美元/1.0毫升小瓶)比較。所有的價(jia) 格都是從(cong) 製造商的網站上收集的。


Lipods293試劑與(yu) lipofectamine 2000 (L2K)對難以轉染的細胞(原代大鼠主動脈平滑肌細胞)的轉染效率的比較。按照製造商的方案，分別通過Lipods293試劑(左圖)和Lipofecatmine 2000 (L2K，右圖)製備大鼠主動脈平滑肌細胞並用pEGFP-N3轉染。轉染效率通過在轉染後24小時用Nikon Eclipse 2000顯微鏡檢測GFP熒光來評估。以上圖片由芝加哥大學肺部和重症監護科的尼古拉·杜林博士提供。


Lipods293試劑與(yu) Fugene HD對難以轉染細胞LNCap細胞的轉染效率的比較。LNCap細胞按照ATCC推薦的程序生長，並按照製造商的方案分別用每孔(6孔板)pBabe-hygro-SSeCKs (1.5ug)和peg FP-N3(0.5 ug)lipods 293試劑(左圖)和Fugene HD(右圖)共轉染。轉染效率通過在轉染後24小時用Nikon Eclipse 2000顯微鏡檢測GFP熒光來評估。以上圖片由羅斯威爾公園癌症研究所的Lyn Gao博士提供。


兩(liang) 個(ge) 實例顯示了Lipods293試劑對難以轉染的細胞(如HepG2和SaoS-2細胞)的功效。95%融合的HepG2和SaoS-2細胞用pEGFP-N3和pSV-？-半乳糖苷酶DNA，分別存在於(yu) 血清/抗生素中。轉染後48小時，通過Zeiss 510共聚焦顯微鏡和？-半乳糖苷酶染色試劑盒。



Lipods293試劑與(yu) 293轉染素對HEK293細胞轉染效率的比較。使用Lipods293體(ti) 外DNA轉染試劑(Ver)用pEGFP-C1質粒轉染的HEK293細胞。II)(上圖)和Invitrogen受歡迎的品牌產(chan) 品293fectin(下圖)。轉染後24小時，通過Nikon Eclipse熒光顯微鏡用DIC相位成像(左圖)和FITC成像(右圖)觀察細胞。


Lipods293試劑與(yu) 293fectin、Xfect和Fugene 6轉染試劑對懸浮293F細胞蛋白質生產(chan) 的比較。30毫升使用Lipods293體(ti) 外DNA轉染試劑(Ver)用pEGFP-6xHis質粒轉染在標準培養(yang) 基中培養(yang) 的293F細胞。II) (20微克質粒DNA)、293轉染素(30微克質粒DNA)、x轉染素(30微克質粒DNA)和Fugene 6 (30微克質粒DNA)。轉染後48小時觀察GFP熒光(左圖), A代表Lipods293，B代表293轉染素，C代表x轉染素，D代表Fugene 6。然後純化6xHis標記的GFP蛋白一個(ge) 尼-NTA阿芬尼特y列。在SDS-PAGE上解析5 ul第一洗脫級分，隨後進行考馬斯亮藍染色(右上圖E ),泳道1用於(yu) Lipods293，泳道2用於(yu) 蛋白質標記，泳道3用於(yu) Xfect，泳道4用於(yu) 293fectin，泳道5用於(yu) Fugene 6。蛋白質產(chan) 量通過分光計定量(右下圖F)。



Lipods293(版本II)和脂質體(ti) LTX (LTX)對慢病毒(LV)產(chan) 生的影響。用lipods 293(Ver。II)和Lipofectamine LTX (LTX)導入293英尺細胞。GFP載體(ti) pHR-SIN-cppt-CMVEWP用於(yu) 測定LV的滴度。將每孔1×105個(ge) 293F細胞鋪在24孔板中，然後加入不同量的載體(ti) 上清液，分別為(wei) 1微升(上圖)和10微升(下圖)。5天後，用FACS傳(chuan) 代細胞。右上角的數字表示轉導細胞的百分比。用Lipods293和L2K產(chan) 生的左心室的滴度分別被定量為(wei) 8x10^6和3x10^6 tu/ml

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