laebio：Human Topoisomerase I Drug Screen Kit 貨號：K003

描述:
該檢測試劑盒包含用於(yu) 藥物篩選目的的I型拓撲異構酶活性常規檢測的試劑。人拓撲異構酶I (topoI)是喜樹堿和其他“拓撲異構酶I毒物"的細胞內(nei) 靶標，其中一些是迄今為(wei) 止鑒定的很有希望的抗癌藥物。Topo I藥物篩選試劑盒具有巨大的價(jia) 值，因為(wei) 它將能夠合理篩選新的抗癌化合物，有朝一日可能用於(yu) 減輕被診斷患有癌症的人的痛苦。包括DNA標記以允許清楚地檢測酶。該檢測對拓撲異構酶I具有特異性。強烈建議將活性人拓撲異構酶I(目錄號P005)與(yu) 該試劑盒一起使用。

應用:

• 體外研究超螺旋對轉錄的影響。
• 體外研究染色質重建。
• 確定自然發生的DNA的超螺旋程度。
• 檢測長度僅相差一個堿基對的突變質粒。
• 通過解螺旋DNA以暴露限製性位點來增加抗性DNA底物的限製性內切酶消化。
• 抗癌藥篩選。

質量控製測試:

1. 通過分析線性KDNA和線性質粒DNA的形成來進行核酸酶汙染的測試。用KDNA或超螺旋pGEM 5Z DNA孵育(4 hrs. at 37^oC in the presence of 10 mM MgCl₂)被執行。在這些條件下不會產生線性DNA或分解產物。
2. Topo II交叉汙染檢查為陰性。在topo II反應條件下，KDNA不能脫去。

套件內(nei) 容:

• 超螺旋質粒底物DNA對照(目錄號D001，

  100微升

  LAE1DNA，0.2微克/微升，適用於100次標準檢測)。
• 鬆弛的質粒DNA標記物(cat# D002，100 ul預鬆弛的pLAE1 DNA，由Topo I以0.04 ug/ul的濃度在凝膠加載緩衝液中製備，適用於20種標準分析)。
• 5X Topo I反應緩衝液(目錄號B001，500微升，適用於100種標準檢測)。
• Topo I停止緩衝液/凝膠加載染料(目錄號B002，500微升，適用於100種標準檢測)。
• 對照抑製劑(目錄# B003，喜樹堿；凍幹)。

檢測條件:

• 建議在最終體積為10微升的Topo I反應緩衝液(40 mM Tris-Cl，pH 7.5，100 mM NaCl或KCl，10mM MgCl)中使用5單位的Topo I活性物質(目錄號P005)進行鬆弛試驗

  ₂

  、0.5 mM EDTA、30微克/毫升BSA)。
• 標準分析:超螺旋質粒DNA(目錄號D001)以0.2微克/反應使用。用5微升(在10微升反應體積中)終止緩衝液(5% sarkosyl，0.0025%溴酚藍，25%甘油)終止反應。然後可以在0.8%天然瓊脂糖凝膠上分析反應產物。
• 每個泳道加載5 ul (0.2 ug)鬆弛的質粒DNA標記(目錄號D002)作為對照。

運輸/儲(chu) 存:
該套件在環境溫度下運輸，應在-20℃下儲(chu) 存^oC.

僅(jin) 供研究使用。

一個(ge) 單位的topo I與(yu) 0.2微克pGEM 5Z DNA在37℃孵育30分鍾^oC.

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