trialtusbiosescience：CRISPR-Cas9 Protein  貨號：40-1320/40-1325

TriAltus Biosescience誕生於(yu) 伯明翰阿拉巴馬大學的創新研究，是一家致力於(yu) 將開創性的clm(CL7/Im7)純化技術商業(ye) 化的衍生公司。Dmitry Vassylyev博士及其團隊開發的這一專(zhuan) 有係統重新定義(yi) 了行業(ye) 中酶純度和活性的標準。

TriAltus的高純度Cas9蛋白用於(yu) CRISPR技術的基因組編輯。重組化膿性鏈球菌Cas9 (wt)蛋白在大腸杆菌具有兩(liang) 個(ge) (N-末端和C-末端)核定位信號(NLS)和CL7標簽，其在純化過程中用切割前蛋白酶除去。Cas9蛋白與(yu) 指導RNA (gRNA)結合，形成穩定的核糖核蛋白(RNP)複合物，使細胞中的基因組編輯高效而精確。

規範

純潔| ~99% (SDS-PAGE凝膠分析)

酶源|化膿性鏈球菌Cas9表達於(yu) 大腸杆菌用兩(liang) 個(ge) (N-末端和C-末端)核定位信號(NLS)，並用我們(men) 的CL7標簽技術純化。

內(nei) 毒素|<0.3 EU/ug by rFC method

儲(chu) 存；儲(chu) 備/運輸專(zhuan) 注度|5毫克/毫升

存儲(chu) 緩衝(chong) |10 mM Tris-Cl pH 8.0，250 mM NaCl，50%甘油

推薦的儲(chu) 存條件|-80攝氏度

過期|按照指示儲(chu) 存時，自收到之日起6個(ge) 月。避免重複冷凍/解凍循環。

圖一。與(yu) 商業(ye) 獲得的Cas9相比，CL7/Im7純化的Cas9的切割活性。在1.2%瓊脂糖/TAE凝膠上解析反應，然後用SYBR GOLD染色。從(cong) 商業(ye) 來源(CO)獲得的Cas9或CL7/Im7純化的Cas9 (Im7)與(yu) 等摩爾(+)，或無(-)，退火的sgRNA複合。將不同濃度的複合物與(yu) 1.1 kb的目標DNA片段在37℃下孵育15分鍾。sgRNA識別目標DNA中間的序列，切割後產(chan) 生約550 bp的片段。Im7純化的Cas9顯示出與(yu) 商業(ye) Cas9相當的活性。

圖二。CL7/Im7純化的Cas9和4步純化的Cas9在細胞中的活性相同。

(一)在用Lonza nucleofector 2b電穿孔和使用來自4步純化(頂行)或1步純化方案(底行)的Cas9WT改變RNP濃度後，人鐮狀細胞iPSCs(誘導多能幹細胞)的相差顯微鏡檢查。

(二)中所示的電穿孔實驗的存活率和修飾表(一)。用兩(liang) 種方案純化的Cas9製備的RNP用一種sgRNA進行測試，該sgRNA被設計用來糾正導致鐮狀細胞病的血紅蛋白中的1 BP錯誤。通過數字PCR評估修飾率。這些蛋白質產(chan) 生了相同的生存力和修飾率，表明在細胞中具有同等的效率。這些測試是由UAB阿拉巴馬大學的蒂姆·湯斯和丁磊完成的。

SKU

100克:40-1320

500克:40-1325

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