PerfectQ Universal Green qPCR Premix

本產(chan) 品是使用 SYBR Green I 嵌合熒光法進行 qPCR 的專(zhuan) 用試劑。 核心組分 Perfect Start DNA Polymerase 是基於(yu) 化學法修飾的熱啟動 DNA聚合酶，配合針對 qPCR 優(you) 化的***適 Buffer,可以有效抑製非特異擴增，從(cong) 而顯著提高擴增效率，適用千進行高靈敏度的 qPCR 反應。本產(chan) 品是一種含有 qPCR 反應錄適濃度 SYBR Green I 的 2x 預混試劑，可以在寬廣的定量區域內(nei) 得到良好的標準曲線，對靶基因進行準確定量、檢測，重複性好，可信度高。 本產(chan) 品中含有特殊的ROX Passive Reference Dye,適應千所有 qPCR 儀(yi) 器，無需在不同儀(yi) 器上調整 ROX 的濃度，隻需在配製反應體(ti) 係時加入引物和模板即可進行擴增。

適用機型Bio-Rad CFX96™， CFX384™ ， iCycler iQ™ ， iQ™5， MyiQ™ ，MiniOpticon™ ， Opticon® ， Opticon 2 ， Chromo4™ ； CepheidSmartCycle®；Eppendorf Mastercycle® ep realplex，realplex 2 s；llluminaEco qPCR ； Qiagen/Corbett Rotar-Gene®Q ， Rotor-Gene® 3000 ，Rotor-Gene® 6000；Roche Applied Science LightCycler™ 480; ThermoScientific PikoReal Cycler；Applied Biosesystems 5700，7000，7300，7700，7900，7900HT, 7900HT Fast；StepOne™，StepOnePlus™；AppliedBiosesystems7500 ， 7500 Fast ， ViiA™7 ； Stratagene MX4000™ ，MX3005P™，MX3000P™。注意：本產(chan) 品使用特殊的 ROX Passive Reference Dye, 適用於(yu) 所有qPCR 儀(yi) 器（無 ROX 校正儀(yi) 器，低濃度 ROX 校正儀(yi) 器，高濃度 ROX校正儀(yi) 器），無需在不同儀(yi) 器上調整 ROX 的濃度。注意事項1. 使用前請上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，並經短暫離心後使用。2. 本產(chan) 品中含有 SYBR Green I 熒光染料和 ROX 染料，保存本產(chan) 品或配製 PCR 反應液時應避免強光照射。3. 如需頻繁使用，可存放於(yu) 2-8℃，盡量避免反複凍融，反複凍融可能使產(chan) 品性能下降。

使用方法1. 在 qPCR 管中配製如下混合液(以 20ul 反應體(ti) 係為(wei) 例)。

試劑                                                                       20ul 體(ti) 係 

PerfectQ Universal Green qPCR Premix              10 ul 

Forward Primer，                                                 10uM 0.4ul 

Reverse Primer，                                                 10uM 0.4ul 

Template DNA /cDNA XulRnase-free Water      up to 20ul

注意：反應體(ti) 係中各組分的量可根據以下原則自行調整：a. 一般來說，反應體(ti) 係中引物終濃度為(wei) 0.2uM 即可得到較好的擴增效果。當反應性能比較差時，可以在終濃度 0.1-1.0uM 範圍內(nei) 調整引物濃度。b. qPCR 靈敏度*高，建立反應體(ti) 係時加入模板量的準確程度對最終定量結果會(hui) 有很大的影響。推薦將模板稀釋後加入反應體(ti) 係中，這樣可以有效提高實驗的重複性。c. 如模板類型為(wei) 未稀釋 cDNA 原液，使用體(ti) 積不應超過 qPCR 反應總體(ti) 積的 1/10。2. 按下列條件進行 qPCR 反應

注意：a. Perfect Start DNA Polymerase 需要熱激活處理以恢複酶活，請至少設置 PCR 反應預變性條件為(wei) 95°C 5min。如果模板的 GC 含量較高，可將預變性時間延長至 10min。。b. 延伸時間請根據使用的 Real-time PCR 儀(yi) 所需要的數據采集最短時間限製自行調整使用 ABI 7700 和 7900HT 時至少 30s; 使用 ABI 7000和7300時至少31s; 使用ABI 7500時至少34s; 使用ABI StepOnePlus™時至少 10s。c. 儀(yi) 器類型不同，融解曲線采集程序不盡相同，使用儀(yi) 器默認融解曲線采集程序即可。