RIPA 裂解液（強）

RIPA 裂解液（強） (RIPA Lysis Buffer)  

RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳(chuan) 統的細胞、組織快速裂解液。RIPA 裂解液裂解後的蛋白樣品可以用於(yu) 常規的 Western、IP 等。RIPA 裂解液的主要成分為(wei) Tris-Hcl，NaCl，Triton X-100， sodium deoxycholate，SDS，可以有效裂解不同樣本並抑製蛋白降解。

RIPA 裂解液 50mL 

運輸與(yu) 保存方法冰袋運輸，4℃保存，有效期一年。 

操作說明：對於(yu) 組織樣品

1. 組織塊用冷 PBS 洗滌，去除血汙。剪成小塊置於(yu) 勻漿器中。

   2. 加入 10 倍組織體(ti) 積本試劑（使用前數分鍾內(nei) 加入蛋白酶抑製劑）冰上全勻漿。

   3. 將勻漿液轉移至 1.5ml 離心管中，振蕩。冰浴 30min，期間用移液器反複吹打，確保細胞全裂解。 

   4. 12000g 離心 5min，收集上清，即為(wei) 總蛋白溶液。 

對於(yu) 培養(yang) 細胞樣品：

 1. 對於(yu) 貼壁細胞： 

a.用 PBS 衝(chong) 洗細胞 2-3 次。最後一次全吸幹殘留液。

b.加入適當體(ti) 積的細胞總蛋白提取試劑（使用前數分內(nei) 加入蛋白酶抑製劑）於(yu) 培養(yang) 板、瓶內(nei) 3-5 分鍾。期間反複晃動培養(yang) 板、瓶，使試劑與(yu) 細胞充分接觸。 

c.用細胞刮刀將細胞及試劑刮下，收集到 1.5ml 離心管中。 

2. 對於(yu) 懸浮細胞：離心收集細胞，每 6 孔板細胞加約 250 ul 細胞總蛋白提取試劑（在使用前數分鍾內(nei) 加入蛋白酶抑製劑），振蕩。 

3. 冰浴 30min，期間每 10 分鍾用 200ul 移液器反複吹打數次，確保細胞全裂解。 

4. 12000g 離心 5min，收集上清，即為(wei) 總蛋白。 

注意事項： 

對於(yu) 組織樣品：每 50mg 組織約加入 1ml 的本試劑裂解。對於(yu) 軟骨、皮膚等組織，可適當減少試劑用量，以提高蛋白濃度。 

對於(yu) 培養(yang) 細胞樣品： 

1. 正常細胞密度下，每個(ge) 6 孔板細胞加入 250ul 左右裂解液。其它類推。

   2. 樣本過量時裂解可能會(hui) 出現較粘稠狀。可用移液器反複吹打，直至呈液狀為(wei) 止。如果一直較稠，可再加入適量裂解液，或者使用超聲破碎儀(yi) 。 

   3. 此試劑對人體(ti) 有害，請適當防護。

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