diagnocine：DIG Labeled Blue Color Marker for Small

diagnocine：DIG Labeled Blue Color Marker for Small RNA

DynaMarker DIG 標記的小 RNA 藍色標記物由彩色（藍色）和 DIG 標記的 6 個(ge) 單鏈核酸組成，其表觀分子量為(wei) RNA 的 100、75、50、40、30 和 20 個(ge) 堿基。該標記物適用於(yu) 監測變性聚丙烯酰胺凝膠電泳和抗 DIG 抗體(ti) 的免疫檢測

圖 1. DynaMarker DIG 標記的小 RNA 藍色標記物 (5 μl) 在 15 % 聚丙烯酰胺 - 7.5 M 尿素凝膠/1 × TBE 緩衝(chong) 液作為(wei) 運行緩衝(chong) 液上的電泳圖譜。

DynaMarker DIG 標記的小 RNA 藍色標記物中條帶的表觀大小與(yu) 未染色 RNA 的大小非常一致，長度為(wei) 100、75、50、40、30 和 20 個(ge) 堿基（準確度約為(wei) 95%，參見表 1） ）。用於(yu) 小 RNA 的 DynaMarker DIG 標記藍色標記物以即用型混合物形式提供，使用前不需要加熱或添加變性劑。

表 1.顯示了與(yu) DynaMarker® Small RNA II 相比的表觀分子量，以及適用於(yu) DynaMarker DIG 標記的小 RNA 藍色標記物電泳的丙烯酰胺濃度。 （* 75 堿基 RNA 來自新合成的 RNA。75 堿基 RNA 不包含在 DynaMarker® Small RNA II 中。）

存儲(chu) 緩衝(chong) 區 

2 mM Tris-HCl (pH8.0)、8mM EDTA、78% 甲酰胺

質量控製 

將 DynaMarker DIG 標記的小 RNA 藍色標記物在 37 °C 下孵育 24 小時後，在 15% 聚丙烯酰胺 - 7.5 M 尿素凝膠電泳中未觀察到標記物明顯降解。 

建議上樣量 5 - 10 µl

電泳條件

確保在 10 - 15% 丙烯酰胺-尿素/1 × TBE 凝膠和 1 × TBE 作為(wei) 運行緩衝(chong) 液上使用此標記物。在其他條件下，條帶無法正確分離。

筆記

為(wei) 了準確地電泳測定分子量，
應使用 DynaMarker® Small RNA II（代碼# DM192）或 DynaMarker® Small RNA II Easy Load（代碼# DM197）。

靈敏度

該標記物適用於(yu) 化學發光（例如CDP-star ®  * 1）免疫分析。靈敏度取決(jue) 於(yu) 高速即時膠片（例如FP-3000B* 2  ）、X光膠片或成像儀(yi) 器的曝光時間長度。下圖顯示了一個(ge) 示例。

圖 2. DynaMarker DIG 標記的小 RNA 和 hsa-miR-21 藍色標記的檢測。將 5 μl DynaMarker DIG 標記的小 RNA 藍色標記和 5 μg MCF-7 總 RNA 印跡到尼龍膜上，並將 hsa-miR-21 與(yu) DIG 標記的 DNA 探針 (2.5 nM) 雜交。使用抗 DIG-AP 抗體(ti) 和 CDP-star® 檢測該標記物和 has-miR-21。

*1：CDP-star® 是 Tropix, Inc. 的商標。
*2：FP-3000B 是 Fujifilm Corp. 的產(chan) 品。

推薦用法 

DynaMarker DIG 標記的小 RNA 藍色標記物適用於(yu) 監測變性丙烯酰胺凝膠電泳和膜上的印跡。一個(ge) 例子如下所示：

• DynaMarker DIG 標記的小 RNA 藍色標記物的電泳和印跡

1) 15%聚丙烯酰胺-7.5M尿素凝膠的製備

40 % 丙烯酰胺：雙溶液 7.5 ml
尿素 9.0 g
10 × TBE 2.0 ml                                 
H2O 至 20 ml

尿素全溶解後，加入 20 μl TEMED 和 100 μl 10% 過硫酸銨。快速混合，然後將凝膠倒入立式凝膠裝置的模具中。

2)上樣和電泳。
使用前將 DynaMarker DIG 標記的小 RNA 藍色標記物全解凍。將變性的 RNA 樣品和 5 μl DynaMarker DIG 標記的小 RNA 藍色標記物裝入孔中，並使用 1 × TBE 電泳緩衝(chong) 液在 200 V 下運行凝膠。 3

)轉移 DynaMarker DIG 標記的小 RNA 藍色標記物和 RNA從(cong) 凝膠到膜（圖 3）。

3-1)切一塊比凝膠稍大的帶正電的尼龍膜。將膜和四張適當尺寸的吸墨紙浸泡在 1 × TBE 緩衝(chong) 液中。
3-2)將兩(liang) 張吸墨紙放在轉移池的陽極平台上。
3-3)將膜放在吸墨紙上。
3-4)將凝膠從(cong) 玻璃板轉移到膜的頂部並壓出任何氣泡。 （*確保膜和凝膠之間沒有氣泡。）
3-5)將另外兩(liang) 張吸墨紙放在凝膠上，然後設置陰極組件。
3-6)以 2 mA/cm2 傳(chuan) 輸 30 - 60 分鍾。
3-7)確保標記物成功轉移到膜上後，除去紙
和凝膠。用 2 × SSC 衝(chong) 洗膜。
3-8)用UV交聯劑將RNA固定在膜上。
3-9)進行Northern雜交(圖4)。

圖 3.
左： (1) 5 µl DynaMarker DIG 標記的小 RNA 藍色標記物、(2) 5 µg 人乳腺總 RNA 和 (3) 5 µg 乳腺腺癌 (MCF-7) 總 RNA 的電泳圖譜12.5 % 聚丙烯酰胺 - 7.5 M 尿素凝膠/1× TBE 緩衝(chong) 液作為(wei) 運行緩衝(chong) 液。
右： 將 (1) - (3) 印跡到尼龍膜上。

圖 4. hsa-miR-21 和 hsa-miR-16 的檢測 DIG 標記的 DNA 探針與(yu) 印有乳腺總 RNA 和 MCF-7 總 RNA 的尼龍膜雜交，並用抗 DIG-AP 抗體(ti) 檢測探針和化學發光AP底物。

paybet雷竞技

1. 國內(nei) 試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾(zhong) 多有名生命科學領域的研究試劑、儀(yi) 器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED Biosesystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosesolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產(chan) 品都提供售後服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為(wei) 客戶全麵解決(jue) 實驗、生產(chan) 、開發需求。公司整合國際與(yu) 國內(nei) 資源，加強網絡建設，提高公司內(nei) 部運作效率，為(wei) 客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為(wei) 客戶提供優(you) 惠的價(jia) 格。

diagnocine：DIG Labeled Blue Color Marker for Small RNA