| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,製藥 | | |
|---|
Cmctag Alapca 納米抗體(ti) 試劑
GFP-Catch-Mag™ 抗 GFP 羊駝納米抗體(ti) 偶聯磁珠 目錄號：AT1773
5 mL（200 次反應）
10 mg/ml
由於檢測細胞內維多利亞水母綠色熒光蛋白 (GFP) 僅需要紫外線或藍光照射，因此它為監測活細胞中的基因表達和蛋白質定位提供了好的手段。
抗 GFP 磁珠是一種羊駝單域抗體，通過酰肼鍵共價連接到磁珠上。該抗體在融合蛋白的 N 端、C 端和內部位置結合 GFP。
測試應用
免疫沉澱（IP）
共免疫沉澱（Co-IP），
染色質免疫沉澱（ChIP）
RNA結合蛋白免疫沉澱（RIP）
酶測定
質譜法
親(qin) 和純化
在IP中，25µL的珠懸浮液用於(yu) 約500µL的粗總細胞裂解物溶液。
最佳稀釋度/濃度應由最終用戶確定。
特性
免疫原
這種納米抗體(ti) 是用帶有 GFP 蛋白的羊駝製成的。
形成
磁珠共軛抗 GFP 納米抗體(ti) ，該產(chan) 品在 10 mM PBS、pH 7.4 和作為(wei) 防腐劑的 0.02% (w/v) 疊氮hua鈉中提供。
儲(chu) 存說明
儲(chu) 存於(yu) 4 °C。不要凍結
該抗體為納米抗體，來自aplaca，其優點如下：
• 快速、可靠和高效的一步免疫沉澱
• 即用型、高穩定性、高親和力
• 下遊 WB 無重抗體鏈和輕抗體鏈幹擾
• 在苛刻的洗滌條件下穩定
• 適用於下遊質譜、CoIP、ChIP、RIP、蛋白質純化等
• 適用於以下樣本：哺乳動物、植物、細菌、酵母、昆蟲等。
結構圖
結合能力
~1mg GFP 蛋白/ml 珠懸浮液
珠子直徑
~ 40 微米
哺乳動物細胞裂解物中 GFP 融合蛋白的免疫沉澱 (IP/CoIP) 方案
該方案旨在對 GFP 標記的融合蛋白進行免疫沉澱，以通過蛋白質免疫印跡或活性測定進行分析。
溶液和試劑
1X 細胞裂解緩衝液：50 mM Tris (pH 7.5)、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EGTA、1% Triton X-100。建議在使用前添加 1 mM PMSF。
1X 洗滌緩衝液：TBS（50 mM Tris HCl，150 mM NaCl，pH 7.5）
5X SDS 上樣緩衝液
1. 準備細胞裂解物
1. 要在非變性條件下收獲細胞，去除培養基並用冰冷的 PBS 衝洗細胞一次。去除 PBS 並向每個板（10 cm，106-107 個細胞）中加入 0.5 mL-1mL 1X 冰冷細胞裂解緩衝液（添加蛋白酶抑製劑混合物和 PMSF），並將板在冰上孵育 30-40 分鍾，4 °旋轉攝氏度。
2. 從平板上刮下裂解的細胞並轉移到微量離心管中。繼續冰上。
3. 在冰上對樣品進行超聲處理 3 次，每次 5 秒（可選步驟）。
4. 4°C、14,000 xg 微量離心 10 分鍾，將上清液轉移到新管中。如有必要，可將裂解物儲存在 –80°C 下。
注意：如果目的蛋白是核蛋白，請使用RIPA裂解液裂解細胞，並加入PIC、1mM PMSF、2.5mM Mgcl2和1mg/ml DNase I。
2. 平衡珠子
1. 顛倒產品管或輕輕上下吹打以重懸珠子。不要渦旋珠子。
2. 吸取 25 µL 珠漿到 EP 管（1.5 mL）中，然後加入 1 mL 冰冷的洗滌緩衝液。用手輕輕搖晃 1-2 分鍾。不要渦旋珠子。
3、磁選60秒。
4. 棄去上清，重複洗滌 3 次。
3. 免疫沉澱
1. 取 500 μL 細胞裂解液，加入 25 μL 抗體偶聯磁珠懸液，4°C 孵育 1-3 小時或 4°C 過夜。
4. 清洗蛋白質-納米抗體-珠複合體
注意：如果研究了 Co-IP 相互作用的蛋白質，請減少洗滌次數，並降低洗滌緩衝液的離子強度。
加入 1.0 mL 的 Wash Buffer 並懸浮珠子複合物，磁選，然後棄去上清液。重複上述步驟至少四次。
5. 下遊分析的洗脫
GFP 融合蛋白的洗脫-根據蛋白質特性或進一步用途推薦兩種洗脫方法：
選項 A：天然洗脫
在酸性條件下用 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5) 洗脫。這是一種快速有效的洗脫方法。用中和緩衝液（1 M Tris，pH 10.4）中和洗脫的蛋白質可能有助於保持其活性。中和緩衝液需要預先放入收集管中。
注意：需提前做初步實驗，確定中和甘氨酸（PH 2.5）需要多少中和緩衝液
選項 B：SDS-PAGE 的變性洗脫
在凝膠電泳和免疫印跡的變性條件下用樣品上樣緩衝液洗脫。
A：用 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5) 洗脫 - 該過程應在室溫下進行。
注意：不要將珠子留在該緩衝液中超過 20 分鍾。
1. 向每個樣品和對照珠複合物中加入 50 µL 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5)。
2. 在 4°C 下輕輕搖動或在旋轉器上孵育樣品和對照 5-10 分鍾。
3. 將試管放入磁力分離器中以收集珠子。將上清液轉移到含有 25-35 μL 中和緩衝液的新管中。小心不要轉移任何珠子。
4. 重複步驟 1-3 以提高洗脫效率，將洗脫液集中在同一管中或通過不同管收集洗脫液。
6. 如需立即使用，請將洗脫液儲存在 2-8 °C。儲存在 –20 °C 以進行長期儲存。
B：用 SDS-PAGE 上樣緩衝液洗脫
1. 用 30 µL 1X SDS 樣品上樣緩衝液重懸每個樣品（6 µL 5X SDS 樣品上樣緩衝液可以添加到 24 µL 細胞裂解緩衝液中）。渦流。
2. 在 95 – 100°C 下將樣品管和對照管煮沸 10 分鍾。
3. 將試管放入磁力分離器中以收集珠子。將上清液轉移到新管中。樣品和對照已準備好加載到 SDS-PAGE 上，並使用抗 GFP 或針對融合蛋白的特異性抗體進行免疫印跡。
paybet雷竞技 是一家專(zhuan) 注於(yu) 分子生物學、細胞生物學、細菌學、遺傳(chuan) 學、免疫學、生物化學、蛋白質學、細胞治療、臨(lin) 床應用等領域，以銷售為(wei) 主的生物技術公司。銷售的產(chan) 品涉及，細胞株和菌株、胎牛血清、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體(ti) 和抗原、細胞因子、技術服務、實驗耗材和消耗品、儀(yi) 器設備等。
Engibody Biotechnology，Inc被Engibody Biotechnology，Inc.收購。Engibody 是用於(yu) 信號轉導途徑的試劑產(chan) 品的。我們(men) 為(wei) 免疫學，腫瘤學，細胞生物學，幹細胞生物學和細胞凋亡提供抗體(ti) ，抑製劑和試劑的全麵創新的產(chan) 品組合。Engibody 通常首先將關(guan) 鍵試劑推向市場， 然後 開發了800多種用於(yu) 抗體(ti) 和抑製劑的產(chan) 品。
除抗體(ti) 外， Engibody 還提供用於(yu) 細胞因子，生長因子和原代細胞的多種試劑。我們(men) 為(wei) 生物係統分析提供完整的解決(jue) 方案。
Engibody 已成長為(wei) 所有實驗室試劑（包括抑製劑，抗體(ti) 和細胞因子）的可靠供應商。 Engibody 近建造了一個(ge) 全新的先進設施，以適應其不斷增長的產(chan) 品線。
Cmctag銷售 GFP-Catch-Mag™ 抗 GFP 羊駝納米抗體(ti) 偶聯磁珠 Cmctag Alapca 納米抗體(ti) 試劑
掃一掃，關注微信
當前位置：
