Aobious 免疫測定試劑盒

Aobious 免疫測定試劑盒

1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶ELISA試劑盒

1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶ELISA試劑盒
目錄號:E0269h

範圍:0.156-10納克/毫升

預期用途

該免疫測定試劑盒允許體(ti) 外定量測定人1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸磷酸二酯酶γ-1、血清、血漿、尿液、組織勻漿和細胞培養(yang) 上清液以及其他生物流體(ti) 中的濃度。


測試原理

該試劑盒中提供的微量滴定板已經預先包被了特異性針對1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1的抗體(ti) 。然後將標準品或樣品加入適當的微量滴定板孔中，將對1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1特異的生物素偶聯的多克隆抗體(ti) 製劑和與(yu) 辣根過氧化物酶(HRP)偶聯的抗生物素蛋白加入每個(ge) 微量滴定板孔中並孵育。然後向每個(ge) 孔中加入TMB底物溶液。隻有那些含有1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1、生物素偶聯的抗體(ti) 和酶偶聯的抗生物素蛋白的孔會(hui) 顯示顏色變化。通過加入硫酸溶液終止酶-底物反應，並用分光光度計在450nm±2nm的波長下測量顏色變化。然後通過將樣品的外徑與(yu) 標準曲線進行比較來確定樣品中的濃度。

材料和部件

試劑數量

檢測板1

標準2

樣本稀釋液1×20毫升

檢測稀釋劑A 1×10毫升

檢測稀釋劑B 1×10毫升

檢測試劑A 1 × 120μl

檢測試劑B 1 × 120μl

洗滌緩衝(chong) 液(25倍濃縮液)1×30毫升

底物1×10毫升

停止溶液1×10毫升

用於(yu) 96孔的平板密封器5

說明1


所需的其他用品

酶標儀(yi)

移液器和移液器吸頭

EP管

去離子水或蒸餾水


工具包的儲(chu) 存

檢測板、標準品、檢測試劑A和檢測試劑B收到後應儲(chu) 存在-20℃下。收到試劑盒後，底物應始終保存在4℃下。其他試劑根據小瓶上的標簽保存。但是為(wei) 了長期保存，請將整個(ge) 試劑盒保存在-20℃下。未使用的條帶應保存在密封袋中，並提供幹燥劑，以盡量減少暴露在潮濕空氣中。檢測試劑盒可在試劑盒的有效期內(nei) 使用(自生產(chan) 日期起六個(ge) 月)。如果按照上述規定儲(chu) 存，打開的檢測試劑盒將保持穩定，直到所示的失效日期。


樣本收集和儲(chu) 存

血清-使用血清分離管(SST ),使樣品凝結30分鍾，然後以大約1000 × g的速度離心15分鍾。取出血清並立即進行分析，或者等分並在-20℃或-80℃下儲(chu) 存樣品。

血漿-使用EDTA或肝素作為(wei) 抗凝劑收集血漿。在采集的30分鍾內(nei) ，將樣品在2℃ - 8℃下以1000 × g離心15分鍾。將樣品儲(chu) 存在-20℃或-80℃下。避免反複凍融循環。

尿液——無菌收集當天的第一次尿液(中段),直接排入無菌容器。離心去除顆粒物質，立即化驗或等分並儲(chu) 存在≤ -20℃下。避免反複凍融循環。

組織勻漿——組織勻漿的製備取決(jue) 於(yu) 組織類型。對於(yu) 該分析，用1X PBS衝(chong) 洗組織以去除多餘(yu) 的血液，在20mL 1X PBS中勻漿，並在≤ -20℃下儲(chu) 存過夜。在進行兩(liang) 次凍融循環以破壞細胞膜後，將勻漿以5000 x g離心5分鍾。去除上清液並立即進行分析，或者等分並在≤ -20℃下儲(chu) 存。

細胞培養(yang) 上清液和其他生物液體(ti) ——通過離心去除顆粒，並立即進行分析，或在-20℃或-80℃下等分並儲(chu) 存樣品。避免反複凍融循環。

注意:

5天內(nei) 使用的樣品可儲(chu) 存在2-8℃下，否則樣品必須儲(chu) 存在-20℃ (1個(ge) 月)或-80℃ (2個(ge) 月)，以避免生物活性損失和汙染。
由於(yu) 某些化學物質的影響，由化學裂解緩衝(chong) 液製備的組織或細胞提取樣本可能會(hui) 導致意外的ELISA結果。
受包括細胞生存力、細胞數量以及取樣時間等因素的影響，試劑盒可能無法檢測到來自細胞培養(yang) 上清液的樣品
樣本溶血會(hui) 影響結果，因此不能檢測溶血標本。
進行檢測時，將樣品緩慢置於(yu) 室溫。
不要使用熱處理過的樣品。

程序的局限性

AOBIOUS僅(jin) 對試劑盒本身負責，但不對檢測過程中消耗的樣品負責。用戶應計算整個(ge) 測試中可能使用的樣本量。請提前預留足夠的樣品。
試劑盒不得在超過試劑盒標簽上的有效期後使用。
請勿將其他批次或來源的試劑混合或替換。
如果樣本生成的值高於(yu) 最高標準，用樣本稀釋劑進一步稀釋樣本，然後重複檢測。標準稀釋劑、操作員、移液技術、清洗技術、培養(yang) 時間或溫度以及試劑盒年限的任何變化都會(hui) 導致結合的變化。

試劑製備

洗滌緩衝(chong) 液-如果濃縮物中有晶體(ti) 形成，加熱至室溫並輕輕混合，直到晶體(ti) 溶解。將30毫升洗滌緩衝(chong) 液濃縮物稀釋到去離子或蒸餾水中，以製備750毫升洗滌緩衝(chong) 液。
標準品-用1.0毫升樣品稀釋液重新配製標準品。這種複溶產(chan) 生200 ng/mL的儲(chu) 備溶液。在進行係列稀釋之前，讓標準品靜置至少15分鍾，並輕輕攪動(不允許直接在孔中進行係列稀釋)。未稀釋的標準作為(wei) 高標準(200 ng/mL)。樣本稀釋劑用作零標準(0 ng/mL)。

納克/毫升200±100。50.0 25.0 12.5 6.25 3.12 0

檢測試劑A和B -分別使用檢測稀釋劑A和B (1:100)稀釋至工作濃度。

化驗程序

讓所有試劑達到室溫(請勿直接在37℃溶解試劑)。移液前，應輕輕旋轉，混合所有試劑。避免起泡。為(wei) 一次實驗保留適當數量的試紙條，並從(cong) 微量滴定板上移除多餘(yu) 的試紙條。取出的試紙條應重新密封，並儲(chu) 存在4℃下，直至試劑盒到期。按照前麵章節的說明準備所有試劑、工作標準和樣品。請在化驗前預測濃度。如果這些值不在標準曲線的範圍內(nei) ，用戶必須為(wei) 他們(men) 的特定實驗確定最佳樣品稀釋度。


每孔添加100 μl標準品、空白或樣品。用板密封器覆蓋。在37℃下孵育2小時。
清除每個(ge) 孔的液體(ti) ，不要衝(chong) 洗。向每個(ge) 孔中添加100 μl檢測試劑工作溶液。用板密封器覆蓋。在37℃下孵育1小時。檢測試劑A工作溶液可能會(hui) 出現渾濁。升溫至室溫，輕輕混合，直到溶液變得均勻。
吸取每個(ge) 孔並清洗，重複該過程三次，總共清洗三次。使用噴射瓶、多通道移液器、歧管分配器或自動清洗器，用清洗緩衝(chong) 液(約400 μl)填充每個(ge) 孔進行清洗。在每個(ge) 步驟中去除液體(ti) 對於(yu) 良好的性能至關(guan) 重要。最後一次清洗後，通過抽吸或傾(qing) 析去除任何殘留的清洗緩衝(chong) 液。將盤子倒置，用幹淨的紙巾吸幹。
向每個(ge) 孔中加入100 μl檢測試劑B工作溶液。用新的板密封劑覆蓋。在37℃下孵育1小時。
重複步驟4中的抽吸/清洗。
向每個(ge) 孔中加入90 μl底物溶液。用新的板密封劑覆蓋。在37℃下孵育15-30分鍾。避光。
向每個(ge) 孔中加入50 μl終止液。如果顏色變化不均勻，輕敲平板以確保充分混合。
使用設置為(wei) 450納米的酶標儀(yi) ，一次測定每個(ge) 孔的光密度。

注意:

吸光度是孵育時間的函數。因此，在開始分析前，建議所有試劑在使用前應新鮮製備，並且所有需要的條形孔都固定在微量滴定框架中。這將確保每個(ge) 移液步驟花費的時間相等，不會(hui) 中斷。
請根據說明小心地重新配製標準品或工作檢測試劑A和B，避免起泡並輕輕混合，直到晶體(ti) 溶解。複溶的標準檢測試劑A和B隻能使用一次。這種分析需要少量的移液。為(wei) 了最大限度地降低移液造成的不精確性，請確保移液器經過校準。建議一次移液吸取10μl以上。
為(wei) 了確保準確的結果，在培養(yang) 步驟中，板密封器的適當粘附是必要的。在孵育步驟之間，不要讓孔長時間無蓋放置。一旦將試劑添加到孔板條中，在檢測過程中的任何時候都不要讓孔板條變幹。
對於(yu) 程序中的每個(ge) 步驟，向檢測板添加試劑的總分配時間不應超過10分鍾。
為(wei) 避免交叉汙染，請在添加每個(ge) 標準水平、添加樣品和添加試劑之間更換移液器吸頭。此外，每種試劑使用單獨的容器。
清洗程序至關(guan) 重要。清洗不充分會(hui) 導致精度下降和吸光度讀數錯誤升高。
盡管不要求，但建議複製所有標準和樣本。
底物溶液容易被汙染。請避光保存。


特征：該分析識別重組和天然人1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1。沒有觀察到明顯的交叉反應或幹擾。

注意:限於(yu) 目前的技術和知識，我們(men) 不可能完成人與(yu) 所有類似物之間的交叉反應檢測，因此，交叉反應可能仍然存在。

探測距離：3.12-200納克/毫升。

統計

平均每個(ge) 標準品、對照品和樣品的重複讀數，並減去平均零標準光密度。使用能夠生成四參數邏輯(4-PL)曲線擬合的計算機軟件，通過減少數據來創建標準曲線。或者，通過在x軸上繪製每個(ge) 標準的平均吸光度與(yu) y軸上的濃度來構建標準曲線，並通過圖上的點繪製最佳擬合曲線。數據可以通過繪製1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1濃度的對數對O.D .的對數來線性化，並且最佳擬合線可以通過回歸分析來確定。建議用一些相關(guan) 的軟件來做這個(ge) 計算，比如曲線專(zhuan) 家1.3。這個(ge) 過程將產(chan) 生一個(ge) 適當的但不太精確的數據擬合。如果樣品已經稀釋，從(cong) 標準曲線讀取的濃度必須乘以稀釋係數。

重要提示:

受目前條件和科學技術的限製，我們(men) 無法對供應商提供的原材料進行全麵的鑒定和分析。因此，使用該試劑盒可能存在一些定性和技術風險
最終的實驗結果將與(yu) 產(chan) 品的有效性、最終用戶的操作技能和實驗環境密切相關(guan) 。請確保有足夠的樣品。
不同批次的試劑盒在檢測範圍、靈敏度和顯色時間上可能略有不同。請嚴(yan) 格按照試劑盒中的說明進行實驗，而我們(men) 網站上的電子說明僅(jin) 供參考。
第一次打開板時，孔中可能有一些模糊的物質。它不會(hui) 對最終檢測結果產(chan) 生任何影響。
除非需要，否則不要從(cong) 儲(chu) 存袋中取出微量滴定板。
帶寬為(wei) 10納米或更小、在450納米波長下光密度範圍為(wei) 0-3 OD或更大的微量滴定板讀數器可用於(yu) 吸光度測量。
每次轉移時使用新的一次性移液器吸頭，以避免汙染。
請勿將試劑從(cong) 一個(ge) 試劑盒批次替換到另一個(ge) 試劑盒批次。僅(jin) 使用製造商提供的試劑。
即使是同一個(ge) 操作員在兩(liang) 個(ge) 不同的實驗中也可能得到不同的結果。為(wei) 了獲得更好的重現性結果，應控製檢測中每一步的操作。此外，建議在對每批產(chan) 品進行檢測前進行初步實驗。
每個(ge) 套件都經過嚴(yan) 格的質量控製測試。然而，由於(yu) 一些意外的運輸條件或不同的實驗室設備，最終用戶的結果可能與(yu) 我們(men) 的內(nei) 部數據不一致。來自不同批次的試劑盒之間的測定內(nei) 差異也可能由上述因素引起。
不同製造商生產(chan) 的同一產(chan) 品的試劑盒可能會(hui) 產(chan) 生不同的結果，因為(wei) 我們(men) 沒有將我們(men) 的產(chan) 品與(yu) 其他製造商的產(chan) 品進行比較。
有效期:六個(ge) 月。

預防

建議與(yu) 該試劑盒一起使用的終止溶液是酸性溶液。使用這種材料時，戴上眼睛、手、臉和衣服防護裝置。

典型數據

此圖表數據作為(wei) 示例顯示。每次運行檢測時，必須生成標準曲線。

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一般儲(chu) 存條件
在沒有任何附加說明的情況下，我們(men) 所有的產(chan) 品都應在4攝氏度的冰箱中短期儲(chu) 存2-6個(ge) 月。

我們(men) 不建議客戶將我們(men) 的產(chan) 品長期存放在他們(men) 自己的地方，因為(wei) 他們(men) 可以隨時從(cong) 我們(men) 這裏訂購他們(men) 需要的確切數量。

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